客户文献分享| IF=14.612，基于酶催化的Asp-Phe-Tyr三肽聚合反应癌症免疫疗
本期解读
题目：A Strategy Based on the Enzyme-Catalyzed Polymerization Reaction of Asp-Phe-Tyr Tripeptide for Cancer Immunotherapy
期刊：JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY
影响因子：14.612/Q1
合作技术：iTRAQ定量蛋白组学
一、研究背景
释放免疫系统的力量被认为是治疗癌症的重要策略。尽管大多数癌症都表达肿瘤特异性抗原，但免疫疗法仍是保守的，反应低且不良反应频繁。一个主要原因是癌症已经获得了抑制抗原呈递的能力。约70-95％的人类癌细胞下调与抗原呈递相关的蛋白质的表达。这些蛋白质的系统性缺乏促使癌细胞逃脱免疫识别。激活免疫系统的努力主要集中在使用拮抗剂或抑制剂靶向某些蛋白质上。但是，单靶标药物的功效是有限的，而免疫疗法为癌症提供了一个有前景的治疗策略。然而，即使在高抗原负担的肿瘤中，全身抑制抗原提呈仍然极大地限制了免疫治疗的应用。在此，研究者构建了一种基于功能三肽Asp-Phe-Tyr (DFY)的肿瘤蛋白工程系统，该系统可以自动收集和传递靶向细胞的免疫肿瘤蛋白到免疫细胞中。通过酪氨酸酶催化聚合，DFY三肽选择性地聚集在酪氨酸酶高表达的黑色素瘤细胞中。然后将富含醌的中间体与肿瘤特异性蛋白通过Michael加成共价连接，形成携带肿瘤蛋白的微纤维，该微纤维可被抗原提呈细胞吞噬，并表现出肿瘤抗原特性以增强免疫效果。在抗原递呈不足的黑色素瘤细胞中，该系统可以成功地富集和运输含有肿瘤抗原的蛋白质到免疫细胞。此外，在小鼠黑色素瘤的体内研究中，DFY三肽经皮传递抑制肿瘤生长和术后复发。
二、技术路线
聚合肽筛选鉴定——聚合肽DFY作用机制解析——DFY作用下功能蛋白差异性分析——肿瘤蛋白交联pDFY的免疫激活机制解析——肿瘤模型DFY抗癌作用验证
三、实验结果
1. 酪氨酸酶催化聚合DFY。
首先，研究者筛选得到一种可被酪氨酸酶催化聚合的肽DFY（Asp-Phe-Tyr），并观察到在聚合过程中产生了不溶性黑色沉淀物，利用倒置显微镜和扫描电子显微镜（SEM）观察均表明是由DFY聚合成的微纤维（图1b和图1b）。然后，研究者研究了各种细胞系中酪氨酸酶基因（TYR）表达的差异，基于CCLE数据库（https://t.cn/Ev9rmGW）分析了TYR基因在740个细胞系中的表达水平，结果表明，与其他癌细胞分型相比，黑色素瘤细胞系表现出最高的TYR基因表达量（图1e）。此外，研究了酪氨酸酶过表达的黑色素瘤细胞中DFY的胞内聚合反应（图1f），结果表明DFY在黑素瘤细胞中的聚合是酪氨酸酶依赖性的。此外，研究者验证了DFY的聚合是否可以在体内原位诱导。将DFY和不可聚合肽（Asp-Phe-Phe，DFF）注射到小鼠癌旁组织中以观察其在肿瘤中的清除情况。如图1i所示，注射的DFY比DFF在肿瘤位置停留的时间更长，相比之下，大多数DFF在肿瘤中被快速清除了，因此推测DFY能在肿瘤组织中特异性聚合。
2. DFY的胞内蛋白捕获。
研究者通过MTT分析表明，DFY在33μM的浓度下可抑制小鼠B16细胞的增殖达57％（图2e），在与各种B16细胞抑制剂孵育后，发现单苯甲酮（酪氨酸酶抑制剂）和谷胱甘肽（GSH）均可将B16细胞从DFY聚合引起的细胞死亡过程中拯救出来（图2f）。Ac-DEVD-CHO（凋亡抑制剂），ferrostatin-1（促肥大症抑制剂），necrostatin-1（坏死性抑制剂），TBHQ和BHA（醌氧化还原酶诱导剂）却无法挽救DFY对细胞的伤害。得出的结论是，单苯甲酮和谷胱甘肽的解毒作用归因于GSH和DFY之间的迈克尔加成。通过荧光显微镜观察，发现长期培养后，微纤维从细胞中释放出来（图4Sd，e）。实验证明DFY收集靶细胞的胞内蛋白，并以类似于坏死的方式将它们转运出细胞，并伴随DFY聚合诱导的细胞死亡。因此，由pDFY携带的肿瘤蛋白的释放可能刺激随后的抗原触发的免疫反应。
3. 交联蛋白的蛋白质组学研究。
由于蛋白质的免疫原性因蛋白质而异，研究者研究了通过抗原工程系统收集的蛋白质类型，与金开瑞合作的串联质谱用于定量分析蛋白质含量。如图3a，b和S5所示，在DFY聚合后，确定了190个上调蛋白和346个下调蛋白（倍数变化1.5和P <0.05，超几何测试）。然后通过GO数据库富集分析了这些差异蛋白的功能。结果表明，这些蛋白质大多数与细胞代谢（氨基酸代谢，糖代谢），能量供应（糖酵解，有氧呼吸）和蛋白质合成（核糖体）相关（图3c）。发现这些蛋白质在功能上涵盖了细胞最重要的生物学功能（图3d）。差异蛋白主要来自核糖体，线粒体，细胞核和高尔基体。此外，通过STRING功能蛋白缔合网络研究了DFY聚合后减少的蛋白质之间的相互作用（图3e）。来自细胞器的蛋白质，特别是核糖体，线粒体和细胞核中的蛋白质，形成紧密的簇。该结果表明DFY可以特异性地交联来自这些细胞器的蛋白质，从而导致这些蛋白质的显着减少。另外，作为专业的产生黑色素的细胞器，还分析了在DFY处理的黑色素瘤细胞中黑色素体的蛋白质表达（图S5）。GO富集分析的结果表明，用DFY处理后，黑素体中的大多数相关蛋白也被下调。使用主成分分析（PCA）分析了Cys含量，理论等电点和差异蛋白质脂肪族指数三个指标（图3f），该结果表明被下调的蛋白质可以被DFY结构结合或化学交联。从实验上观察到，DFY处理可抑制线粒体功能，抑制蛋白质合成并损害细胞骨架形成（图S6）。这些实验结果与理论推测吻合良好。
4. 肿瘤蛋白交联pDFY的免疫激活。
为了研究B16细胞释放的纤维是否可以被APC吞噬，通过共聚焦荧光显微镜和流式细胞术检查了B16和APC（RAW264.7和DC）对DFY或pDFY的摄取（图4a，b）。荧光成像表明DFY在各种细胞中积累，但pDFY倾向于被APC吞噬。该观察证明，纤维携带的抗原蛋白更倾向于递送至APC。为了阐明pDFY携带的肿瘤蛋白是否能增强免疫反应，用流式细胞仪进一步分析了裂解物蛋白交联的pDFY在DCs成熟中的能力（图4c）。与裂解物组相比，裂解物+ pDFY在DC的成熟度上增加了2.3倍。此外，与裂解物+ pDFY相比，裂解物@pDFY诱导的DC成熟也更为显着（P = 0.0002）。然后将B16蛋白交联的经pDFY处理的B16细胞和脾细胞以1:10的比例共孵育，以研究智能抗原工程系统引发针对癌细胞的特异性免疫反应的能力（图4d），研究发现经裂解物@pDFY处理的脾细胞消除了59.3％的B16细胞。相反，裂解物或裂解物+ pDFY处理的脾细胞的混合物仅杀死了不到30％的B16细胞。携带肿瘤抗原蛋白的裂解物@ pDFY成功触发了针对B16细胞的特异性免疫杀伤。在此基础上，考虑到pDFY的佐剂作用和交联蛋白的强免疫原性，抗原工程系统可作为黑色素瘤治疗的免疫增强疫苗型材料。最后，经B16荷瘤小鼠皮下药物注射研究，证明了由于某些功能蛋白被裂解物@ pDFY富集，裂解物@ pDFY可以成功激活体内抗癌免疫反应。
5. DFY在不可切除黑色素瘤中的抗癌作用。
随后，研究者对抗原工程系统的肿瘤抑制能力进行了分析。抗PD1抗体（aPD1）或化学治疗药物已与基于DFY的抗原工程系统结合用于治疗B16荷瘤小鼠（图5a）实验结果表明DFY + aPD1的治疗抑制了91％的肿瘤生长。研究者还记录了各种治疗后小鼠的存活率（图5c）。在所有组中，用DFY + aPD1处理的小鼠的存活时间最长。该结果表明，肿瘤周围注射DFY不仅可以收集可能含有肿瘤抗原的肿瘤蛋白，而且可以将免疫原性肿瘤蛋白递送至APC并引起随后的CTL激活以抑制肿瘤进展。酶联免疫吸附试验（ELISA）显示，DFY + aPD1处理后，包括干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）在内的免疫激活标记物增加（图5f）。
6. DFY经皮给药治疗黑色素瘤。
研究者将凝胶状的DFY @ gel作为一种透皮治疗系统，粘附在皮肤上时释放DFY。如图6g所示，在相同深度下，用DFY @ gel治疗的肿瘤的平均荧光强度（MFI）高于DFY。使用V-C扩散池和荧光光谱仪研究了分离的猪皮中DFY @ gel的透皮吸收。与游离DFY相比，DFY @ gel的透皮渗透提高了1.5倍（图6h）。然后通过测量肿瘤体积评估DFY @ gel抑制肿瘤生长的能力（图6i）。在为期16天的实验中，DFY @ gel显示出与DFY（腹膜内注射）相似的治疗效果。IFN-α在临床上用于术后黑色素瘤的治疗。与临床方案相比，评估了DFY @ gel的治疗效果。IFN-α和经皮凝胶治疗均显着抑制了肿瘤的复发。该结果表明透皮DFY @ gel在预防黑素瘤复发方面具有与临床上使用的IFN-α几乎相同的治疗效果。
四、小结
在这项研究中，研究者设计了一种基于肽的肿瘤蛋白工程系统，该系统对黑素瘤治疗表现出强大的免疫原性。一旦进入恶性黑色素瘤细胞，该三肽进行酪氨酸酶催化的氧化聚合。同时，通过迈克尔加成反应还捕获了来自细胞核，线粒体和核糖体的高免疫原性功能蛋白，这引起了类似于坏死的快速细胞死亡。随后，肿瘤蛋白交联的pDFY从垂死和破裂的癌细胞中释放出来，形成的聚集纤维更易于被APC内吞。因此，设计的肿瘤蛋白质工程系统成功地收集了免疫原性蛋白质并将其递送至APC，并表现出辅助作用以增强免疫应答以消除肿瘤。DFY的经皮免疫疗法在小鼠和小型猪模型中也显示出高效率和高生物相容性，并显着延长了肿瘤小鼠的存活时间。在可切除的黑色素瘤中，发现DFY@gel具有与临床IFN-α治疗相似的复发预防效果。
了解金开瑞iTRAQ定量蛋白质组学技术：https://t.cn/A6V4xP7Y
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题目：A Strategy Based on the Enzyme-Catalyzed Polymerization Reaction of Asp-Phe-Tyr Tripeptide for Cancer Immunotherapy
期刊：JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY
影响因子：14.612/Q1
合作技术：iTRAQ定量蛋白组学
一、研究背景
释放免疫系统的力量被认为是治疗癌症的重要策略。尽管大多数癌症都表达肿瘤特异性抗原，但免疫疗法仍是保守的，反应低且不良反应频繁。一个主要原因是癌症已经获得了抑制抗原呈递的能力。约70-95％的人类癌细胞下调与抗原呈递相关的蛋白质的表达。这些蛋白质的系统性缺乏促使癌细胞逃脱免疫识别。激活免疫系统的努力主要集中在使用拮抗剂或抑制剂靶向某些蛋白质上。但是，单靶标药物的功效是有限的，而免疫疗法为癌症提供了一个有前景的治疗策略。然而，即使在高抗原负担的肿瘤中，全身抑制抗原提呈仍然极大地限制了免疫治疗的应用。在此，研究者构建了一种基于功能三肽Asp-Phe-Tyr (DFY)的肿瘤蛋白工程系统，该系统可以自动收集和传递靶向细胞的免疫肿瘤蛋白到免疫细胞中。通过酪氨酸酶催化聚合，DFY三肽选择性地聚集在酪氨酸酶高表达的黑色素瘤细胞中。然后将富含醌的中间体与肿瘤特异性蛋白通过Michael加成共价连接，形成携带肿瘤蛋白的微纤维，该微纤维可被抗原提呈细胞吞噬，并表现出肿瘤抗原特性以增强免疫效果。在抗原递呈不足的黑色素瘤细胞中，该系统可以成功地富集和运输含有肿瘤抗原的蛋白质到免疫细胞。此外，在小鼠黑色素瘤的体内研究中，DFY三肽经皮传递抑制肿瘤生长和术后复发。
二、技术路线
聚合肽筛选鉴定——聚合肽DFY作用机制解析——DFY作用下功能蛋白差异性分析——肿瘤蛋白交联pDFY的免疫激活机制解析——肿瘤模型DFY抗癌作用验证
三、实验结果
1. 酪氨酸酶催化聚合DFY。
首先，研究者筛选得到一种可被酪氨酸酶催化聚合的肽DFY（Asp-Phe-Tyr），并观察到在聚合过程中产生了不溶性黑色沉淀物，利用倒置显微镜和扫描电子显微镜（SEM）观察均表明是由DFY聚合成的微纤维（图1b和图1b）。然后，研究者研究了各种细胞系中酪氨酸酶基因（TYR）表达的差异，基于CCLE数据库（https://t.cn/Ev9rmGW）分析了TYR基因在740个细胞系中的表达水平，结果表明，与其他癌细胞分型相比，黑色素瘤细胞系表现出最高的TYR基因表达量（图1e）。此外，研究了酪氨酸酶过表达的黑色素瘤细胞中DFY的胞内聚合反应（图1f），结果表明DFY在黑素瘤细胞中的聚合是酪氨酸酶依赖性的。此外，研究者验证了DFY的聚合是否可以在体内原位诱导。将DFY和不可聚合肽（Asp-Phe-Phe，DFF）注射到小鼠癌旁组织中以观察其在肿瘤中的清除情况。如图1i所示，注射的DFY比DFF在肿瘤位置停留的时间更长，相比之下，大多数DFF在肿瘤中被快速清除了，因此推测DFY能在肿瘤组织中特异性聚合。
2. DFY的胞内蛋白捕获。
研究者通过MTT分析表明，DFY在33μM的浓度下可抑制小鼠B16细胞的增殖达57％（图2e），在与各种B16细胞抑制剂孵育后，发现单苯甲酮（酪氨酸酶抑制剂）和谷胱甘肽（GSH）均可将B16细胞从DFY聚合引起的细胞死亡过程中拯救出来（图2f）。Ac-DEVD-CHO（凋亡抑制剂），ferrostatin-1（促肥大症抑制剂），necrostatin-1（坏死性抑制剂），TBHQ和BHA（醌氧化还原酶诱导剂）却无法挽救DFY对细胞的伤害。得出的结论是，单苯甲酮和谷胱甘肽的解毒作用归因于GSH和DFY之间的迈克尔加成。通过荧光显微镜观察，发现长期培养后，微纤维从细胞中释放出来（图4Sd，e）。实验证明DFY收集靶细胞的胞内蛋白，并以类似于坏死的方式将它们转运出细胞，并伴随DFY聚合诱导的细胞死亡。因此，由pDFY携带的肿瘤蛋白的释放可能刺激随后的抗原触发的免疫反应。
3. 交联蛋白的蛋白质组学研究。
由于蛋白质的免疫原性因蛋白质而异，研究者研究了通过抗原工程系统收集的蛋白质类型，与金开瑞合作的串联质谱用于定量分析蛋白质含量。如图3a，b和S5所示，在DFY聚合后，确定了190个上调蛋白和346个下调蛋白（倍数变化1.5和P <0.05，超几何测试）。然后通过GO数据库富集分析了这些差异蛋白的功能。结果表明，这些蛋白质大多数与细胞代谢（氨基酸代谢，糖代谢），能量供应（糖酵解，有氧呼吸）和蛋白质合成（核糖体）相关（图3c）。发现这些蛋白质在功能上涵盖了细胞最重要的生物学功能（图3d）。差异蛋白主要来自核糖体，线粒体，细胞核和高尔基体。此外，通过STRING功能蛋白缔合网络研究了DFY聚合后减少的蛋白质之间的相互作用（图3e）。来自细胞器的蛋白质，特别是核糖体，线粒体和细胞核中的蛋白质，形成紧密的簇。该结果表明DFY可以特异性地交联来自这些细胞器的蛋白质，从而导致这些蛋白质的显着减少。另外，作为专业的产生黑色素的细胞器，还分析了在DFY处理的黑色素瘤细胞中黑色素体的蛋白质表达（图S5）。GO富集分析的结果表明，用DFY处理后，黑素体中的大多数相关蛋白也被下调。使用主成分分析（PCA）分析了Cys含量，理论等电点和差异蛋白质脂肪族指数三个指标（图3f），该结果表明被下调的蛋白质可以被DFY结构结合或化学交联。从实验上观察到，DFY处理可抑制线粒体功能，抑制蛋白质合成并损害细胞骨架形成（图S6）。这些实验结果与理论推测吻合良好。
4. 肿瘤蛋白交联pDFY的免疫激活。
为了研究B16细胞释放的纤维是否可以被APC吞噬，通过共聚焦荧光显微镜和流式细胞术检查了B16和APC（RAW264.7和DC）对DFY或pDFY的摄取（图4a，b）。荧光成像表明DFY在各种细胞中积累，但pDFY倾向于被APC吞噬。该观察证明，纤维携带的抗原蛋白更倾向于递送至APC。为了阐明pDFY携带的肿瘤蛋白是否能增强免疫反应，用流式细胞仪进一步分析了裂解物蛋白交联的pDFY在DCs成熟中的能力（图4c）。与裂解物组相比，裂解物+ pDFY在DC的成熟度上增加了2.3倍。此外，与裂解物+ pDFY相比，裂解物@pDFY诱导的DC成熟也更为显着（P = 0.0002）。然后将B16蛋白交联的经pDFY处理的B16细胞和脾细胞以1:10的比例共孵育，以研究智能抗原工程系统引发针对癌细胞的特异性免疫反应的能力（图4d），研究发现经裂解物@pDFY处理的脾细胞消除了59.3％的B16细胞。相反，裂解物或裂解物+ pDFY处理的脾细胞的混合物仅杀死了不到30％的B16细胞。携带肿瘤抗原蛋白的裂解物@ pDFY成功触发了针对B16细胞的特异性免疫杀伤。在此基础上，考虑到pDFY的佐剂作用和交联蛋白的强免疫原性，抗原工程系统可作为黑色素瘤治疗的免疫增强疫苗型材料。最后，经B16荷瘤小鼠皮下药物注射研究，证明了由于某些功能蛋白被裂解物@ pDFY富集，裂解物@ pDFY可以成功激活体内抗癌免疫反应。
5. DFY在不可切除黑色素瘤中的抗癌作用。
随后，研究者对抗原工程系统的肿瘤抑制能力进行了分析。抗PD1抗体（aPD1）或化学治疗药物已与基于DFY的抗原工程系统结合用于治疗B16荷瘤小鼠（图5a）实验结果表明DFY + aPD1的治疗抑制了91％的肿瘤生长。研究者还记录了各种治疗后小鼠的存活率（图5c）。在所有组中，用DFY + aPD1处理的小鼠的存活时间最长。该结果表明，肿瘤周围注射DFY不仅可以收集可能含有肿瘤抗原的肿瘤蛋白，而且可以将免疫原性肿瘤蛋白递送至APC并引起随后的CTL激活以抑制肿瘤进展。酶联免疫吸附试验（ELISA）显示，DFY + aPD1处理后，包括干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）在内的免疫激活标记物增加（图5f）。
6. DFY经皮给药治疗黑色素瘤。
研究者将凝胶状的DFY @ gel作为一种透皮治疗系统，粘附在皮肤上时释放DFY。如图6g所示，在相同深度下，用DFY @ gel治疗的肿瘤的平均荧光强度（MFI）高于DFY。使用V-C扩散池和荧光光谱仪研究了分离的猪皮中DFY @ gel的透皮吸收。与游离DFY相比，DFY @ gel的透皮渗透提高了1.5倍（图6h）。然后通过测量肿瘤体积评估DFY @ gel抑制肿瘤生长的能力（图6i）。在为期16天的实验中，DFY @ gel显示出与DFY（腹膜内注射）相似的治疗效果。IFN-α在临床上用于术后黑色素瘤的治疗。与临床方案相比，评估了DFY @ gel的治疗效果。IFN-α和经皮凝胶治疗均显着抑制了肿瘤的复发。该结果表明透皮DFY @ gel在预防黑素瘤复发方面具有与临床上使用的IFN-α几乎相同的治疗效果。
四、小结
在这项研究中，研究者设计了一种基于肽的肿瘤蛋白工程系统，该系统对黑素瘤治疗表现出强大的免疫原性。一旦进入恶性黑色素瘤细胞，该三肽进行酪氨酸酶催化的氧化聚合。同时，通过迈克尔加成反应还捕获了来自细胞核，线粒体和核糖体的高免疫原性功能蛋白，这引起了类似于坏死的快速细胞死亡。随后，肿瘤蛋白交联的pDFY从垂死和破裂的癌细胞中释放出来，形成的聚集纤维更易于被APC内吞。因此，设计的肿瘤蛋白质工程系统成功地收集了免疫原性蛋白质并将其递送至APC，并表现出辅助作用以增强免疫应答以消除肿瘤。DFY的经皮免疫疗法在小鼠和小型猪模型中也显示出高效率和高生物相容性，并显着延长了肿瘤小鼠的存活时间。在可切除的黑色素瘤中，发现DFY@gel具有与临床IFN-α治疗相似的复发预防效果。
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realme Q3 Pro参数来了，天玑1100处理器+6400万三摄+120Hz三星AMOLED屏幕+30W闪充，同价位应该没有对手了，1599这个价格相当可以。
个人比较期待天玑1100的性能表现，跑分上来说比855强，如果天玑1100能打赢骁龙780G，这对联发科来说是个翻身之战。
其次就是这次realme Q3 Pro的颜值相当给力，我愿称realme Q3 Pro的颜值是千元机最强，感觉配置也是！香就完事了
#realme Q3#
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陕西2021年第一批10件重大劳动保障违法行为公布
近日，二三里从陕西省人力资源和社会保障厅了解到，为加强对重大劳动保障违法行为和拖欠工资违法失信对象的惩戒，强化社会舆论监督，促进用人单位遵守劳动保障法律、法规和规章，有力维护劳动者合法权益，省人社厅根据相关规定，依法公布10件重大劳动保障违法行为。
一、旬阳县城关镇李二鲜鱼村火锅店拖欠劳动报酬案
旬阳县城关镇李二鲜鱼村火锅店，统一社会信用代码：92610928MA70NM7773；地址：旬阳县城关镇鲁家台社区商贸大街277号二楼；负责人：金柏连。
2020年12月14日，旬阳县劳动保障监察大队接到劳动者投诉，反映旬阳县城关镇李二鲜鱼村火锅店存在拖欠劳动者劳动报酬问题。
经查，旬阳县城关镇李二鲜鱼村火锅店存在拖欠吉某某等11名劳动者劳动报酬3.7963万元，2020年11月，该单位停业且负责人失联。
2020年12月15日，旬阳县人力资源社会保障局在单位经营场地张贴《劳动保障监察调查询问书》，邮寄送达至由投诉人提供的金柏连住所，文书被退回。2020年12月29日，旬阳县人力资源社会保障局在单位经营场地张贴《劳动保障监察限期改正指令书》，并邮寄送达至由投诉人提供的金柏连住所，文书被退回。
2021年1月20日，旬阳县人力资源社会保障局以涉嫌拒不支付劳动报酬罪依法将该案移送旬阳县公安局，旬阳县公安局正在侦办中。
二、西安博鑫景观膜结构技术有限公司拖欠劳动报酬案
西安博鑫景观膜结构技术有限公司，统一社会信用代码：916101006838680271；地址：西安市未央区纬二十六街颐馨花园8幢12004室；法定代表人：李双双。
2021年1月21日，铜川市人力资源社会保障局陆续接到劳动者投诉，反映铜川新区铜煤一二号小区室外膜结构车棚项目存在拖欠劳动者劳动报酬问题。
经查，西安博鑫景观膜结构技术有限公司在承包铜川新区铜煤一二号小区室外膜结构车棚项目中，因与总包单位陕西昱业宏通建筑有限公司发生工程款纠纷，拖欠64名劳动者劳动报酬241.2523万元。
2021年2月9日，铜川市人力资源社会保障局向西安博鑫景观膜结构技术有限公司依法下达了《责令改正决定书》，该公司逾期未履行。
三、西安盛隆源劳务有限公司拖欠劳动报酬案
西安盛隆源劳务有限公司，统一社会信用代码：91610112MA6W2LQG1X；地址：陕西省西安市未央区北辰立交明宫雅居8号楼5单元601室；法定代表人：程振方。
2020年12月9日，铜川市人力资源社会保障局接到劳动者投诉，反映西安盛隆源劳务有限公司铜川新区吉富电缆厂2号、5号、6号厂房项目存在拖欠劳动报酬问题。
经查，西安盛隆源劳务有限公司承建的陕西吉富和平电源有限责任公司2号、5号、6号厂房项目，未按月足额支付劳动报酬，涉及拖欠52名劳动者2020年9月28日至12月7日9万元劳动报酬。
2021年2月22日，铜川市人力资源社会保障局向西安盛隆源劳务有限公司依法下达了《行政处理决定书》，责令该公司限期支付所拖欠的劳动报酬，该公司逾期未履行。
2021年3月16日，铜川市人力资源社会保障局将该公司列入违法失信“黑名单”。
四、铜川通泽物流仓储有限公司拖欠劳动报酬案
铜川通泽物流仓储有限公司，统一社会信用代码：91610202MA6X65FQ21；地址：陕西省铜川市王益区玉华路28号（玉华家居建材城位于物流区7号房）；法定代表人：高磊。
2020年11月2日，铜川市王益区人力资源社会保障局接到劳动者投诉，反映铜川通泽物流仓储有限公司存在拖欠劳动者劳动报酬问题。
经查，铜川通泽物流仓储有限公司拖欠5名劳动者劳动报酬4.58493万元。2020年11月13日，铜川市王益区人力资源社会保障局向铜川通泽物流仓储有限公司依法下达了《责令改正决定书》，责令该公司限期支付所拖欠劳动报酬，该公司逾期未履行。
2021年1月21日，该公司以转账方式将所拖欠劳动报酬支付到位。
五、陕西盛乐宸建筑工程有限公司拖欠劳动报酬案
陕西盛乐宸建筑工程有限公司，统一社会信用代码：91610113MA6U6JAA51；地址：陕西省西安市雁塔区电子城街道办西沣馨苑小区翟家堡4号楼902号；法定代表人：盛登攀。
2020年12月24日，王益区人力资源社会保障局接到劳动者投诉，反映陕西盛乐宸建筑工程有限公司存在拖欠劳动报酬问题。
经查，陕西盛乐宸建筑工程有限公司在铜川市王益区玉华新苑租赁型保障房建设项目中拖欠31名农民工工资75万元。2020年12月29日，王益区人力资源社会保障局向陕西盛乐宸建筑工程有限公司依法下达了《责令改正决定》，该公司逾期未履行。
经多次督促，陕西盛乐宸建筑工程有限公司于2021年1月7日至1月14日期间足额支付了所拖欠的劳动报酬。
六、四川宇峰通信工程有限公司拖欠劳动报酬案
四川宇峰通信工程有限公司，统一社会信用代码:91510700692253438L；地址：绵阳高新区河边镇上游村六组；法定代表人：兰俊。
2020年8月17日，汉中市宁强县人力资源社会保障局接到劳动者投诉，反映四川宇峰通信工程有限公司存在拖欠劳动者劳动报酬问题。
经查，四川宇峰通信工程有限公司在承建2018年汉中LTE七期基站配套光缆线路工程一阶段设计项目（宁强县汉源基站5处）中，在甲方工程款拨付到位的情况下仍拖欠20名劳动者劳动报酬28.6232万元。2020年9月21日，宁强县人力资源社会保障局依法向该公司下达《劳动保障监察限期改正指令书》，该公司逾期未履行。
2020年11月2日，宁强县人力资源社会保障局以涉嫌拒不支付劳动报酬罪依法将该案移送宁强县公安局。2021年1月31日，该公司将所拖欠劳动报酬支付完毕。
七、福建省海峡中运建设有限公司拖欠劳动报酬案
福建省海峡中运建设有限公司，统一社会信用代码:91350504054305707C；地址：福建省泉州市洛江区马甲镇新民村12号；法定代表人：杜鸿蒙。
2020年7月14日，汉中市南郑区人力资源社会保障局接到劳动者投诉，反映福建省海峡中运建设有限公司存在拖欠劳动者劳动报酬问题。
经查，福建省海峡中运建设有限公司承建的龙岗一品项目拖欠14名劳动者劳动报酬共计33.256万元。2020年8月3日，南郑区人力资源社会保障局依法向该公司下达《劳动保障监察限期整改指令书》，该公司逾期未履行。
2020年9月17日，南郑区人力资源社会保障局以涉嫌拒不支付劳动报酬罪依法将该案移送汉中市公安局南郑分局。2020年11月23日，由施工总承包企业陕西建达实业集团有限公司将所拖欠劳动报酬先行垫付完毕。
八、汉中御祥汽车销售服务有限公司拖欠劳动报酬案
汉中御祥汽车销售服务有限公司，统一社会信用代码:91610700MA6YN2DC0Q；地址：陕西省汉中市汉台区鑫源办事处兴元湖居委会三组49号；法定代表人：党红英。
2019年8月，汉中市汉台区人力资源社会保障局接到劳动者投诉，反映汉中御祥汽车销售服务有限公司存在拖欠劳动者劳动报酬问题。
经查，汉中御祥汽车销售服务有限公司拖欠6名劳动者劳动报酬共计10.6518万元。2020年2月19日，汉台区人力资源社会保障局依法向该公司下达《行政处理决定书》，该公司逾期未履行。
2020 年11月18日，汉台区人力资源社会保障局依法将该案移送汉台区人民法院强制执行。
九、汉中乐惠优选超市有限公司略阳分公司拖欠劳动报酬案
汉中乐惠优选超市有限公司略阳分公司，统一社会信用代码：91610727MA6YXQQC3R；地址：陕西省汉中市略阳县兴洲铭座2单元1楼；法定代表人：孙溶涛。
2020年10月16日，汉中市略阳县人力资源社会保障局接到劳动者投诉，反映汉中乐惠优选超市有限公司略阳分公司存在拖欠劳动者劳动报酬问题。
经查，汉中乐惠优选超市有限公司略阳分公司累计拖欠13名劳动者劳动报酬5.7224万元。2020年11月9日和2020年12月23日，略阳县人力资源社会保障局分别向汉中乐惠优选超市有限公司略阳分公司依法送达了《劳动保障监察限期改正指令书》和《行政处理决定书》，该公司逾期均未履行。
2020年12月10日，略阳县人力资源社会保障局以涉嫌拒不支付劳动报酬罪依法将该案移送略阳县公安局。2021年1月22日，该公司将所拖欠劳动报酬支付完毕。
十、陕西汉龙实业有限公司拖欠劳动报酬案
陕西汉龙实业有限公司，统一社会信用代码：916107230881875505；地址：陕西省汉中市洋县磨子桥镇磨子桥街；法定代表人：李培林。
2019年11月15日，汉中市洋县人力资源社会保障局接到劳动者投诉，反映陕西汉龙实业有限公司存在拖欠劳动者劳动报酬问题。
经查，陕西汉龙实业有限公司因经营不善，导致拖欠67名劳动者劳动报酬18.7万元。2020年4月17日，洋县人力资源社会保障局依法向该公司下达了《劳动保障监察限期改正指令书》，该公司逾期未履行。
2020年4月29日，洋县人力资源社会保障局以涉嫌拒不支付劳动报酬罪依法将该案移送洋县公安局，洋县公安局于2020年7月6日立案侦查，10月28日实施网上追逃，2020年11月28日李培林被抓获，目前该公司已筹集资金7万元，正在筹集剩余劳动报酬。
（二三里 czh）
近日，二三里从陕西省人力资源和社会保障厅了解到，为加强对重大劳动保障违法行为和拖欠工资违法失信对象的惩戒，强化社会舆论监督，促进用人单位遵守劳动保障法律、法规和规章，有力维护劳动者合法权益，省人社厅根据相关规定，依法公布10件重大劳动保障违法行为。
一、旬阳县城关镇李二鲜鱼村火锅店拖欠劳动报酬案
旬阳县城关镇李二鲜鱼村火锅店，统一社会信用代码：92610928MA70NM7773；地址：旬阳县城关镇鲁家台社区商贸大街277号二楼；负责人：金柏连。
2020年12月14日，旬阳县劳动保障监察大队接到劳动者投诉，反映旬阳县城关镇李二鲜鱼村火锅店存在拖欠劳动者劳动报酬问题。
经查，旬阳县城关镇李二鲜鱼村火锅店存在拖欠吉某某等11名劳动者劳动报酬3.7963万元，2020年11月，该单位停业且负责人失联。
2020年12月15日，旬阳县人力资源社会保障局在单位经营场地张贴《劳动保障监察调查询问书》，邮寄送达至由投诉人提供的金柏连住所，文书被退回。2020年12月29日，旬阳县人力资源社会保障局在单位经营场地张贴《劳动保障监察限期改正指令书》，并邮寄送达至由投诉人提供的金柏连住所，文书被退回。
2021年1月20日，旬阳县人力资源社会保障局以涉嫌拒不支付劳动报酬罪依法将该案移送旬阳县公安局，旬阳县公安局正在侦办中。
二、西安博鑫景观膜结构技术有限公司拖欠劳动报酬案
西安博鑫景观膜结构技术有限公司，统一社会信用代码：916101006838680271；地址：西安市未央区纬二十六街颐馨花园8幢12004室；法定代表人：李双双。
2021年1月21日，铜川市人力资源社会保障局陆续接到劳动者投诉，反映铜川新区铜煤一二号小区室外膜结构车棚项目存在拖欠劳动者劳动报酬问题。
经查，西安博鑫景观膜结构技术有限公司在承包铜川新区铜煤一二号小区室外膜结构车棚项目中，因与总包单位陕西昱业宏通建筑有限公司发生工程款纠纷，拖欠64名劳动者劳动报酬241.2523万元。
2021年2月9日，铜川市人力资源社会保障局向西安博鑫景观膜结构技术有限公司依法下达了《责令改正决定书》，该公司逾期未履行。
三、西安盛隆源劳务有限公司拖欠劳动报酬案
西安盛隆源劳务有限公司，统一社会信用代码：91610112MA6W2LQG1X；地址：陕西省西安市未央区北辰立交明宫雅居8号楼5单元601室；法定代表人：程振方。
2020年12月9日，铜川市人力资源社会保障局接到劳动者投诉，反映西安盛隆源劳务有限公司铜川新区吉富电缆厂2号、5号、6号厂房项目存在拖欠劳动报酬问题。
经查，西安盛隆源劳务有限公司承建的陕西吉富和平电源有限责任公司2号、5号、6号厂房项目，未按月足额支付劳动报酬，涉及拖欠52名劳动者2020年9月28日至12月7日9万元劳动报酬。
2021年2月22日，铜川市人力资源社会保障局向西安盛隆源劳务有限公司依法下达了《行政处理决定书》，责令该公司限期支付所拖欠的劳动报酬，该公司逾期未履行。
2021年3月16日，铜川市人力资源社会保障局将该公司列入违法失信“黑名单”。
四、铜川通泽物流仓储有限公司拖欠劳动报酬案
铜川通泽物流仓储有限公司，统一社会信用代码：91610202MA6X65FQ21；地址：陕西省铜川市王益区玉华路28号（玉华家居建材城位于物流区7号房）；法定代表人：高磊。
2020年11月2日，铜川市王益区人力资源社会保障局接到劳动者投诉，反映铜川通泽物流仓储有限公司存在拖欠劳动者劳动报酬问题。
经查，铜川通泽物流仓储有限公司拖欠5名劳动者劳动报酬4.58493万元。2020年11月13日，铜川市王益区人力资源社会保障局向铜川通泽物流仓储有限公司依法下达了《责令改正决定书》，责令该公司限期支付所拖欠劳动报酬，该公司逾期未履行。
2021年1月21日，该公司以转账方式将所拖欠劳动报酬支付到位。
五、陕西盛乐宸建筑工程有限公司拖欠劳动报酬案
陕西盛乐宸建筑工程有限公司，统一社会信用代码：91610113MA6U6JAA51；地址：陕西省西安市雁塔区电子城街道办西沣馨苑小区翟家堡4号楼902号；法定代表人：盛登攀。
2020年12月24日，王益区人力资源社会保障局接到劳动者投诉，反映陕西盛乐宸建筑工程有限公司存在拖欠劳动报酬问题。
经查，陕西盛乐宸建筑工程有限公司在铜川市王益区玉华新苑租赁型保障房建设项目中拖欠31名农民工工资75万元。2020年12月29日，王益区人力资源社会保障局向陕西盛乐宸建筑工程有限公司依法下达了《责令改正决定》，该公司逾期未履行。
经多次督促，陕西盛乐宸建筑工程有限公司于2021年1月7日至1月14日期间足额支付了所拖欠的劳动报酬。
六、四川宇峰通信工程有限公司拖欠劳动报酬案
四川宇峰通信工程有限公司，统一社会信用代码:91510700692253438L；地址：绵阳高新区河边镇上游村六组；法定代表人：兰俊。
2020年8月17日，汉中市宁强县人力资源社会保障局接到劳动者投诉，反映四川宇峰通信工程有限公司存在拖欠劳动者劳动报酬问题。
经查，四川宇峰通信工程有限公司在承建2018年汉中LTE七期基站配套光缆线路工程一阶段设计项目（宁强县汉源基站5处）中，在甲方工程款拨付到位的情况下仍拖欠20名劳动者劳动报酬28.6232万元。2020年9月21日，宁强县人力资源社会保障局依法向该公司下达《劳动保障监察限期改正指令书》，该公司逾期未履行。
2020年11月2日，宁强县人力资源社会保障局以涉嫌拒不支付劳动报酬罪依法将该案移送宁强县公安局。2021年1月31日，该公司将所拖欠劳动报酬支付完毕。
七、福建省海峡中运建设有限公司拖欠劳动报酬案
福建省海峡中运建设有限公司，统一社会信用代码:91350504054305707C；地址：福建省泉州市洛江区马甲镇新民村12号；法定代表人：杜鸿蒙。
2020年7月14日，汉中市南郑区人力资源社会保障局接到劳动者投诉，反映福建省海峡中运建设有限公司存在拖欠劳动者劳动报酬问题。
经查，福建省海峡中运建设有限公司承建的龙岗一品项目拖欠14名劳动者劳动报酬共计33.256万元。2020年8月3日，南郑区人力资源社会保障局依法向该公司下达《劳动保障监察限期整改指令书》，该公司逾期未履行。
2020年9月17日，南郑区人力资源社会保障局以涉嫌拒不支付劳动报酬罪依法将该案移送汉中市公安局南郑分局。2020年11月23日，由施工总承包企业陕西建达实业集团有限公司将所拖欠劳动报酬先行垫付完毕。
八、汉中御祥汽车销售服务有限公司拖欠劳动报酬案
汉中御祥汽车销售服务有限公司，统一社会信用代码:91610700MA6YN2DC0Q；地址：陕西省汉中市汉台区鑫源办事处兴元湖居委会三组49号；法定代表人：党红英。
2019年8月，汉中市汉台区人力资源社会保障局接到劳动者投诉，反映汉中御祥汽车销售服务有限公司存在拖欠劳动者劳动报酬问题。
经查，汉中御祥汽车销售服务有限公司拖欠6名劳动者劳动报酬共计10.6518万元。2020年2月19日，汉台区人力资源社会保障局依法向该公司下达《行政处理决定书》，该公司逾期未履行。
2020 年11月18日，汉台区人力资源社会保障局依法将该案移送汉台区人民法院强制执行。
九、汉中乐惠优选超市有限公司略阳分公司拖欠劳动报酬案
汉中乐惠优选超市有限公司略阳分公司，统一社会信用代码：91610727MA6YXQQC3R；地址：陕西省汉中市略阳县兴洲铭座2单元1楼；法定代表人：孙溶涛。
2020年10月16日，汉中市略阳县人力资源社会保障局接到劳动者投诉，反映汉中乐惠优选超市有限公司略阳分公司存在拖欠劳动者劳动报酬问题。
经查，汉中乐惠优选超市有限公司略阳分公司累计拖欠13名劳动者劳动报酬5.7224万元。2020年11月9日和2020年12月23日，略阳县人力资源社会保障局分别向汉中乐惠优选超市有限公司略阳分公司依法送达了《劳动保障监察限期改正指令书》和《行政处理决定书》，该公司逾期均未履行。
2020年12月10日，略阳县人力资源社会保障局以涉嫌拒不支付劳动报酬罪依法将该案移送略阳县公安局。2021年1月22日，该公司将所拖欠劳动报酬支付完毕。
十、陕西汉龙实业有限公司拖欠劳动报酬案
陕西汉龙实业有限公司，统一社会信用代码：916107230881875505；地址：陕西省汉中市洋县磨子桥镇磨子桥街；法定代表人：李培林。
2019年11月15日，汉中市洋县人力资源社会保障局接到劳动者投诉，反映陕西汉龙实业有限公司存在拖欠劳动者劳动报酬问题。
经查，陕西汉龙实业有限公司因经营不善，导致拖欠67名劳动者劳动报酬18.7万元。2020年4月17日，洋县人力资源社会保障局依法向该公司下达了《劳动保障监察限期改正指令书》，该公司逾期未履行。
2020年4月29日，洋县人力资源社会保障局以涉嫌拒不支付劳动报酬罪依法将该案移送洋县公安局，洋县公安局于2020年7月6日立案侦查，10月28日实施网上追逃，2020年11月28日李培林被抓获，目前该公司已筹集资金7万元，正在筹集剩余劳动报酬。
（二三里 czh）
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