快12点的时候，有个我去年去成都开大会加了微信的人给我打语音，我从加完微信之后跟这个人一句话都没聊过，不知道她为什么给我打语音，她迅速取消并说一句“抱歉，手滑了”。
我实时转播给我的室友听，有个室友听了之后说:“你回她＇帕金森都没你手滑＇。”
我跟另一个室友听了之后，笑得停不下来。#科研狗的日常#
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国自然的科学问题，到底该怎么凝练？
在写标书或者基金时，最重要的工作其实是提炼科学问题。
基金资助的目的也在于解决提出来的科学问题，然后推动科学科技发展。
那么到底什么是科学问题呢？怎么判断一个研究问题是不是科学问题？
这125个科学问题会衍生出125*1000个小问题，而125*1000个小问题才是我们一般科研工作者能解决的
“国自然的科学问题”至少具备以下几个特征：
“别人没做过”：创新性高，前人完全没研究过或者研究不深入；
“符合科学常识”：基于前人的众多科研成果的铺垫；
“问题有意义”：它的解决有助于推动新的科学发现以及临床应用；
“预实验支持”：从自身的预实验结果结合国内外研究现状推导而来；
“量力而为的探索”：基于自己目前的研究实力和团队能力而提出；
都说科学假说是标书的灵魂，但“拟解决的科学问题”又是科学假说的落脚点。
形成科学假说易，凝练“科学问题”难。
笔者以为国自然中的科学问题可以归纳为以下几类：
临床诊断应用类：疾病的早期诊断和发现，对于改善疾病预后极为重要，但诸多疾病的早期诊断都存在严重的不足（成本高、周期长或者灵敏度和特异性低），XX疾病的生物标志物的探索是永远的科学话题；
治疗评价类：疾病发生过程中，若能发现致病的效应分子或者因素，对其进行干预（上调或者下调，或者使用中医药来干预），并通过在体功能学研究予以证明，得出显著统计结果，将会对XX疾病的治疗提供显而易见的理论支持；
细胞功能类：科学问题的探索有必要下沉到细胞维度，细胞是组织器官的基本组成单元，致病的效应分子或者因素参与疾病的发生，往往是通过细胞（微环境）功能失调（或过渡激活）导致的，所以针对细胞维度，需要给出确切的致病证明过程；
单纯的分子机制：由于细胞的功能执行直接来源是蛋白质，而DNA-RNA-蛋白质的遗传信息途径是蛋白质拷贝数和功能维持的理论基础，所以在基金申请中聚焦于细胞功能失调或者过渡激活过程中XX效应分子的调控机制研究就成为重中之重。
某新型技术的性能评价：工欲善其事必先利其器，研究方法的不断优化和提升也是国自然资助的一个领域，例如近几年火热的CRISPR基因技术、单细胞测序、空间转录组测序、药物递送系统的应用，等等，能在方法学角度上，对于深入探索科学发现提供巨大有利的帮助。
新的疾病模型探索：现如今疾病的种类越来越多，而疾病模型如果仅仅只有经典的模式动物的话，远不能满足效果评价的需要，所以在XX疾病领域国家鼓励新型动物模型、或者新型的药物评价系统的建立，例如类器官的出现。
我们以随机挑选的三个国自然项目，对其“拟解决关键科学问题”进行拆解的话，可如下：
（1）中标项目1：PHB2介导PINK1/Parkin通路调控神经元线粒体自噬在缺血性脑卒中的作用及机制研究。
① PHB2、线粒体自噬的干预是否可以改善缺血性脑卒中的预后，是第一个拟解决科学问题；
② PHB2是否调控神经元线粒体自噬参与缺血性脑卒中发病过程，是第二个拟解决的关键科学问题；
③ PHB2是否通过激活（或抑制）PINK1/Parkin通路调控神经元线粒体自噬，是第三个拟解决的关键科学问题。
（2）中标项目2：ALKBH5通过AGAP2的m6A转录后修饰参与脑胶质瘤恶性进展的机制研究。
① ALKBH5、AGAP2是否可以作为脑胶质瘤早期诊断的标志物，是第一个拟解决科学问题；
② ALKBH5、AGAP2的干预是否可以改善脑胶质瘤恶性进展，是第二个拟解决科学问题；
③ ALKBH5是否通过AGAP2的m6A转录后修饰激活XXX信号通路促进胶质瘤细胞的侵袭转移过程，是第三个拟解决关键科学问题；
（3）中标项目3：神经元TRPV1通过CGRP（钙素基因相关肽）调控骨缺损修复的作用和机制研究。
① TRPV1、CGRP的干预是否可以改善骨缺损的预后，是第一个拟解决科学问题；
② 神经元调控CGRP（钙素基因相关肽）的表达和分泌规律，是第二个拟解决的关键科学问题；
③ TRPV1如何通过CGRP（钙素基因相关肽）的表达机制，是第三个拟解决的关键科学问题；
希望上述的“望文生义”的猜想，对于国自然标书撰写的你有启发意义，如有错误，还望交流指正。
持续分享学术干货，敬请关注～
#科研狗的日常[超话]##论文##肿瘤[超话]##博士后##科研[超话]##医生##网络药理学[超话]##基金课题##论文[超话]##国自然##博士后##研究生##医学生##国自然基金课题##国自然##国自然落选专家意见[超话]# https://t.cn/A6lPCNxV
在写标书或者基金时，最重要的工作其实是提炼科学问题。
基金资助的目的也在于解决提出来的科学问题，然后推动科学科技发展。
那么到底什么是科学问题呢？怎么判断一个研究问题是不是科学问题？
这125个科学问题会衍生出125*1000个小问题，而125*1000个小问题才是我们一般科研工作者能解决的
“国自然的科学问题”至少具备以下几个特征：
“别人没做过”：创新性高，前人完全没研究过或者研究不深入；
“符合科学常识”：基于前人的众多科研成果的铺垫；
“问题有意义”：它的解决有助于推动新的科学发现以及临床应用；
“预实验支持”：从自身的预实验结果结合国内外研究现状推导而来；
“量力而为的探索”：基于自己目前的研究实力和团队能力而提出；
都说科学假说是标书的灵魂，但“拟解决的科学问题”又是科学假说的落脚点。
形成科学假说易，凝练“科学问题”难。
笔者以为国自然中的科学问题可以归纳为以下几类：
临床诊断应用类：疾病的早期诊断和发现，对于改善疾病预后极为重要，但诸多疾病的早期诊断都存在严重的不足（成本高、周期长或者灵敏度和特异性低），XX疾病的生物标志物的探索是永远的科学话题；
治疗评价类：疾病发生过程中，若能发现致病的效应分子或者因素，对其进行干预（上调或者下调，或者使用中医药来干预），并通过在体功能学研究予以证明，得出显著统计结果，将会对XX疾病的治疗提供显而易见的理论支持；
细胞功能类：科学问题的探索有必要下沉到细胞维度，细胞是组织器官的基本组成单元，致病的效应分子或者因素参与疾病的发生，往往是通过细胞（微环境）功能失调（或过渡激活）导致的，所以针对细胞维度，需要给出确切的致病证明过程；
单纯的分子机制：由于细胞的功能执行直接来源是蛋白质，而DNA-RNA-蛋白质的遗传信息途径是蛋白质拷贝数和功能维持的理论基础，所以在基金申请中聚焦于细胞功能失调或者过渡激活过程中XX效应分子的调控机制研究就成为重中之重。
某新型技术的性能评价：工欲善其事必先利其器，研究方法的不断优化和提升也是国自然资助的一个领域，例如近几年火热的CRISPR基因技术、单细胞测序、空间转录组测序、药物递送系统的应用，等等，能在方法学角度上，对于深入探索科学发现提供巨大有利的帮助。
新的疾病模型探索：现如今疾病的种类越来越多，而疾病模型如果仅仅只有经典的模式动物的话，远不能满足效果评价的需要，所以在XX疾病领域国家鼓励新型动物模型、或者新型的药物评价系统的建立，例如类器官的出现。
我们以随机挑选的三个国自然项目，对其“拟解决关键科学问题”进行拆解的话，可如下：
（1）中标项目1：PHB2介导PINK1/Parkin通路调控神经元线粒体自噬在缺血性脑卒中的作用及机制研究。
① PHB2、线粒体自噬的干预是否可以改善缺血性脑卒中的预后，是第一个拟解决科学问题；
② PHB2是否调控神经元线粒体自噬参与缺血性脑卒中发病过程，是第二个拟解决的关键科学问题；
③ PHB2是否通过激活（或抑制）PINK1/Parkin通路调控神经元线粒体自噬，是第三个拟解决的关键科学问题。
（2）中标项目2：ALKBH5通过AGAP2的m6A转录后修饰参与脑胶质瘤恶性进展的机制研究。
① ALKBH5、AGAP2是否可以作为脑胶质瘤早期诊断的标志物，是第一个拟解决科学问题；
② ALKBH5、AGAP2的干预是否可以改善脑胶质瘤恶性进展，是第二个拟解决科学问题；
③ ALKBH5是否通过AGAP2的m6A转录后修饰激活XXX信号通路促进胶质瘤细胞的侵袭转移过程，是第三个拟解决关键科学问题；
（3）中标项目3：神经元TRPV1通过CGRP（钙素基因相关肽）调控骨缺损修复的作用和机制研究。
① TRPV1、CGRP的干预是否可以改善骨缺损的预后，是第一个拟解决科学问题；
② 神经元调控CGRP（钙素基因相关肽）的表达和分泌规律，是第二个拟解决的关键科学问题；
③ TRPV1如何通过CGRP（钙素基因相关肽）的表达机制，是第三个拟解决的关键科学问题；
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国自然项目中的细胞模型和动物模型，你选对了吗？
科研中在深入研究XX分子机制时，必不可少地要探讨到XX分子在YY器官和ZZ细胞中的作用，因此分子功能研究必定少不了细胞模型和动物模型，但时常地你会遇到“动物模型选择的困难”“单一细胞模型不足以代表器官整体功能的情况”。
咱们今天来聊聊国自然标书中的细胞模型和动物模型，如何选择很重要，以免让专家给你质疑，进而导致申请失败。
（一）动物模型的构建可独自撑起一项国自然课题
模式动物由来已久，最常见物种的就是小鼠、大鼠、斑马鱼、兔子、猪、比特犬、猴子等，模式动物的饲养和标准建立是不难的，但是难点在于重大疾病的动物模型，相当不完善。
例如，国自然资助类别里就有这样的资助。
人类重大疾病大动物模型建立：主要针对人类重大脑疾病、心血管疾病和代谢性疾病，支持非人灵长类、猪等大动物疾病模型建立、表型分析和表型数据平台等研究，为揭示重大疾病发病机制、发现疾病诊断和治疗药物靶点、开展药物筛选和细胞治疗等提供平台与支撑。
（二）而国自然常见疾病的传统动物模型，你选对了吗？
众所周知，肿瘤的动物模型最简单易懂，你以为只有两种：①皮下成瘤（最常用）；②原位癌、转移灶的诱变。
然而真实情况如下：
而其他非肿瘤疾病在选择动物模型时，也需要根据疾病成因，针对性地诱导疾病模型了，因为不同病因导致的同一表型的组织器官病变，疾病发生机制不同，而动物模型的选择也要区别对待，我们以骨质疏松为例：
1)最常见的骨质疏松症当属：原发性I型绝经后骨质疏松症。绝经后骨质疏松症模型。绝经后卵巢功能下降，体内雌激素分泌减少，从而造成骨吸收增强，导致快速的骨丢失。所以大鼠卵巢切除术(OVX)模型是最普遍和最广泛的骨质疏松的动物模型。
2)糖皮质激素相关性骨质疏松症是继发性骨质疏松症最常见的类型。应用糖皮质激素(glucocor-ticoid)可引起动物机体的钙磷代谢紊乱，亦可减少前成骨细胞向功能性成骨细胞转化，使骨基质形成减少而诱发骨质疏松。
3)老年性骨质疏松症模型：SAMP6 小鼠可作为老年性骨质疏松症模型，它是目前仅有的一种能证明增龄性骨脆性骨折的动物。
4)维甲酸模型：维甲酸能激活机体内破骨细胞促进骨吸收,但对成骨细胞活性无抑制作用，对骨形成及骨基质的矿化过程也无明显影响，最终使机体内骨重建处于骨吸收大于骨形成的负平衡状态，从而导致动物出现骨质疏松。
。。。。等等，不同骨质疏松模型代表不同的病因导致的骨质疏松，要区别对待。
（三）国自然细胞模型的来源和数量，也要注意
1)不同病理类型肿瘤项目中的细胞系。ATCC和中科院细胞库，以及中国公司都有肿瘤细胞系（购买时一定索要STR鉴定证书）。STR即短串联重复序列（Short Tandem Repeats），也称微卫星DNA（microsatellite DNA），又被称为细胞的DNA指纹。由于细胞系交叉污染或错误辨识而导致研究错误、结果不可重复等情况的存在，因此建议进行细胞的STR鉴定分析。
肿瘤细胞的选择也讲究来源，一般和肿瘤的病理类型相关（例如腺癌，鳞癌等分类），以胆管癌为例。胆管癌分为肝内胆管癌（intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC）、肝外胆管癌（extrahepatic cholangiocarcinoma，ECC），所以发生在肝中的肿瘤不全是肝细胞癌。那么在选择细胞系是要分为：ICC细胞系（HCCC9810，HUCCT，RBE等）以及ECC细胞系（QBC939、EGI-1、FRH-0201等）。
而腺癌，鳞癌的实验中也要选择相对应类型来源的细胞系。
而耐药系列的肿瘤细胞系，每次都要经过耐药筛选，当然也可以通过市场上购买，不过可信度要打一个问号。
另外，当进行人免疫学的动物实验时，一般都会使用裸鼠，那么就不能使用人肿瘤细胞接种动物了，就只能换做同个物种的肿瘤细胞。
等等，以此类推。
2)非肿瘤疾病的细胞系。非肿瘤疾病的组织细胞不能无限传代和培养（例如心肌细胞、神经元、肌肉细胞、小胶质细胞、少突胶质细胞、肾足细胞、肝实质细胞、肝kupffer细胞），要么就只能每次实验不断获取原代细胞进行实验，要么就使得原代细胞能永生化筛选。
聪明的科研人员就改造细胞系，使之永生化，无限传代下去。例如可以通过病毒感染方式，筛选永生化的细胞，例如猿猴病毒40 (SV40) 、hTERT 、HPV E6/E7、EBV、MycT58A、RasV12病毒。原代细胞永生化后即获得无限增殖的能力，但它们没有恶性转化的表型特征，即不能在软琼脂上形成克隆(锚着独立性生长)，也不能在裸鼠皮下成瘤。
细胞系使用最好参考大量SCI中大部分科研人员使用的细胞系，如果自建细胞系，很可能会让专家觉得你的科研成果没有普适性，因为你不是大牛，你自建的细胞系到底有多靠谱未可知，因此国自然申请中尽量使用成熟的，大家公认的细胞系。
除非万不得已，国自然中不要使用自建细胞系，尽量使用公认细胞系。
3)细胞的数量。国自然中细胞系的数量要求2-3个，以防单一的细胞系实验失败的情况。
持续分享学术干货，感兴趣的快快点赞收藏关注吧～
#论文##科研狗的日常[超话]##科研[超话]##博士后##医生##医生[超话]##医学生##基金课题##国自然##肿瘤[超话]##考研##网络药理学[超话]##研究生##研究生[超话]##实验##医学生[超话]##qpcr##细胞实验##动物实验##科研狗的日常[超话]# https://t.cn/A6lPCNxV
科研中在深入研究XX分子机制时，必不可少地要探讨到XX分子在YY器官和ZZ细胞中的作用，因此分子功能研究必定少不了细胞模型和动物模型，但时常地你会遇到“动物模型选择的困难”“单一细胞模型不足以代表器官整体功能的情况”。
咱们今天来聊聊国自然标书中的细胞模型和动物模型，如何选择很重要，以免让专家给你质疑，进而导致申请失败。
（一）动物模型的构建可独自撑起一项国自然课题
模式动物由来已久，最常见物种的就是小鼠、大鼠、斑马鱼、兔子、猪、比特犬、猴子等，模式动物的饲养和标准建立是不难的，但是难点在于重大疾病的动物模型，相当不完善。
例如，国自然资助类别里就有这样的资助。
人类重大疾病大动物模型建立：主要针对人类重大脑疾病、心血管疾病和代谢性疾病，支持非人灵长类、猪等大动物疾病模型建立、表型分析和表型数据平台等研究，为揭示重大疾病发病机制、发现疾病诊断和治疗药物靶点、开展药物筛选和细胞治疗等提供平台与支撑。
（二）而国自然常见疾病的传统动物模型，你选对了吗？
众所周知，肿瘤的动物模型最简单易懂，你以为只有两种：①皮下成瘤（最常用）；②原位癌、转移灶的诱变。
然而真实情况如下：
而其他非肿瘤疾病在选择动物模型时，也需要根据疾病成因，针对性地诱导疾病模型了，因为不同病因导致的同一表型的组织器官病变，疾病发生机制不同，而动物模型的选择也要区别对待，我们以骨质疏松为例：
1)最常见的骨质疏松症当属：原发性I型绝经后骨质疏松症。绝经后骨质疏松症模型。绝经后卵巢功能下降，体内雌激素分泌减少，从而造成骨吸收增强，导致快速的骨丢失。所以大鼠卵巢切除术(OVX)模型是最普遍和最广泛的骨质疏松的动物模型。
2)糖皮质激素相关性骨质疏松症是继发性骨质疏松症最常见的类型。应用糖皮质激素(glucocor-ticoid)可引起动物机体的钙磷代谢紊乱，亦可减少前成骨细胞向功能性成骨细胞转化，使骨基质形成减少而诱发骨质疏松。
3)老年性骨质疏松症模型：SAMP6 小鼠可作为老年性骨质疏松症模型，它是目前仅有的一种能证明增龄性骨脆性骨折的动物。
4)维甲酸模型：维甲酸能激活机体内破骨细胞促进骨吸收,但对成骨细胞活性无抑制作用，对骨形成及骨基质的矿化过程也无明显影响，最终使机体内骨重建处于骨吸收大于骨形成的负平衡状态，从而导致动物出现骨质疏松。
。。。。等等，不同骨质疏松模型代表不同的病因导致的骨质疏松，要区别对待。
（三）国自然细胞模型的来源和数量，也要注意
1)不同病理类型肿瘤项目中的细胞系。ATCC和中科院细胞库，以及中国公司都有肿瘤细胞系（购买时一定索要STR鉴定证书）。STR即短串联重复序列（Short Tandem Repeats），也称微卫星DNA（microsatellite DNA），又被称为细胞的DNA指纹。由于细胞系交叉污染或错误辨识而导致研究错误、结果不可重复等情况的存在，因此建议进行细胞的STR鉴定分析。
肿瘤细胞的选择也讲究来源，一般和肿瘤的病理类型相关（例如腺癌，鳞癌等分类），以胆管癌为例。胆管癌分为肝内胆管癌（intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC）、肝外胆管癌（extrahepatic cholangiocarcinoma，ECC），所以发生在肝中的肿瘤不全是肝细胞癌。那么在选择细胞系是要分为：ICC细胞系（HCCC9810，HUCCT，RBE等）以及ECC细胞系（QBC939、EGI-1、FRH-0201等）。
而腺癌，鳞癌的实验中也要选择相对应类型来源的细胞系。
而耐药系列的肿瘤细胞系，每次都要经过耐药筛选，当然也可以通过市场上购买，不过可信度要打一个问号。
另外，当进行人免疫学的动物实验时，一般都会使用裸鼠，那么就不能使用人肿瘤细胞接种动物了，就只能换做同个物种的肿瘤细胞。
等等，以此类推。
2)非肿瘤疾病的细胞系。非肿瘤疾病的组织细胞不能无限传代和培养（例如心肌细胞、神经元、肌肉细胞、小胶质细胞、少突胶质细胞、肾足细胞、肝实质细胞、肝kupffer细胞），要么就只能每次实验不断获取原代细胞进行实验，要么就使得原代细胞能永生化筛选。
聪明的科研人员就改造细胞系，使之永生化，无限传代下去。例如可以通过病毒感染方式，筛选永生化的细胞，例如猿猴病毒40 (SV40) 、hTERT 、HPV E6/E7、EBV、MycT58A、RasV12病毒。原代细胞永生化后即获得无限增殖的能力，但它们没有恶性转化的表型特征，即不能在软琼脂上形成克隆(锚着独立性生长)，也不能在裸鼠皮下成瘤。
细胞系使用最好参考大量SCI中大部分科研人员使用的细胞系，如果自建细胞系，很可能会让专家觉得你的科研成果没有普适性，因为你不是大牛，你自建的细胞系到底有多靠谱未可知，因此国自然申请中尽量使用成熟的，大家公认的细胞系。
除非万不得已，国自然中不要使用自建细胞系，尽量使用公认细胞系。
3)细胞的数量。国自然中细胞系的数量要求2-3个，以防单一的细胞系实验失败的情况。
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