#驴友[超话]#『户外记录 | 与死神共舞…』
登山永远是自己和自己较劲，人不可能战胜自然，只能在一次次挑战的过程中不断拓展自我边界和对世界的认知。在一个男性丛林拼杀的女性该是什么样子？一个数次与死亡擦肩而过但依然选择一次次重新出发的女性该是什么样子？
女性力量既可以包容万物，又可以气吞山河。很多人喜欢给我加上“登山家”的头衔，因为我是为数不多登顶过珠穆朗玛峰的中国女子登山运动员，但在我看来，所谓“职业运动员”应该可以凭借自己的项目带来不错的收入，过上更好的生活。
这个头衔看似很光鲜，但我完全不是，从选择登山以来，我没有品牌赞助，也没找过赞助商，我不想让自己在登山的时候总是想着杂事，背上除了背包之外的负担，所以我选择自己承担每一次登山的费用。
毫不夸张地说，登山是一项吃钱的项目，以珠峰为例，单次登珠峰的价格就要40万，这还不包括登山前的训练课程、全身心投入准备中所需要的时间成本，和其他更大的代价。
很多人觉得，我从原本的人生轨道走上了一条名利双收的道路，但事实上，选择登山之后，我的收入大幅减少，常常让自己处在吃老本的处境。
我身边的人会说，如果我还在做原本的工作，还在当那个干练精致的女白领，我的人生会更“容易”一些，因为从前的我几乎就是电视剧里精英女性的形象，我供职于一家世界500强企业，白天奔忙在各个经销商那里，闲暇时间出入高档购物中心，我每天都要穿戴得体背名牌包，一丝不苟的做发型和妆容。
那时，我拼命努力的工作，除了金钱上的收获，慢慢也在圈内积累了一些名气。但同时，我也开始做休闲式的徒步和登山，不知道各位在看的朋友是否有相同的感受，现代人的生活压力，很容易在山水间释放，当我的脚步踏在并不平坦的山路上时，工作上的琐事已经很难再扰乱我，我面前只有一条路，无法后退只能前进。
这种忘掉生活烦恼，专注眼前当下的感觉实在太令人着迷了，我一次一次在工作的间隙寻找释放的机会。直到比我小十岁的登山运动员，我已故的丈夫走进了我的生活，与他同行攀登的机会摆在我面前，我第一次走到了那个人生的十字路口。
于是，我的人生中有了两个截然不同的选择：继续做我的销售经理；或者辞掉工作去完成我的攀登梦想。要说完全没有纠结是不可能的，我的职场焦虑已经很难纾解，每天醒来我都觉得有些绝望，理想很丰满，但职场上的难题已经到了我用努力无法完成的地步了。
我开始劝自己：既然无论如何都完不成，何不干脆给自己放个长一点的假期，等“玩”够了我再考虑要不要重新回到这片战场。当时我的想法很简单，我仍旧无法完全放下的我的那些职场经验、人脉和资源，我只想有个假期能从攀登山峰回来再有重新选择的机会。但没想到，与先生第一次的攀登之旅完全改变了我的人生轨迹。
我很明白，我绝不想再背负职场的压力去过我的余生，我爱登山我爱探险，我就是要遵从自己的内心，去过我想要的生活。
登山这件事，有成功就会有失败，有站在山巅的人，就会有死在半路的人。我见过太多死在半路的人，虽然不像《珠峰清道夫》所拍摄的那么惨烈，但这个项目和行业就是会有死亡的风险。
很多人喜欢问我，为什么痴迷于登山。我的答案是：我喜欢我的生活在别处。当你在山脚下的大本营与不同国家的爱好者畅谈时，当你的足迹遍布这个世界上人迹罕至的地域时，当你在完全陌生的地方重新“活”一次的时候，那种快乐很难描述，它不完全是登山给予我的，而是从准备到完成的一整个过程。
但我必须说明，这个过程的不美好程度也一度令我难以承受，那就是死亡。每次攀登走进大本营，出行前我脑海中有无数的幻想，我幻想着站在世界之巅的成就感，幻想着环顾四周时辽阔世界带给我的冲击。
我的队友也与我一同在大本营做准备，这段时间我们朝夕相处，早就成为了无话不谈的好友。登山时团队成员互相之间的信任很重要，你要把自己的生死交给队友，我称之为“过命的交情”。
我很感激我的妈妈，她是真正懂我的人，很少“要求”我的人生必须怎样过。所以后来我真正登上珠峰的那一刻，我举着我自己自制的一面小旗子拍了张照片，旗子上写着：妈妈你是我的骄傲。这张照片我从没给别人看过，这是专属我和我妈的一张照片。
坦白说，我热爱生命，我越探索这个世界，就越认识到它的美好，就越想继续探索，我不想在自己这么年轻的时候就告别这个世界。我还有未完成的梦想，还有许许多多想去的地方。
但是，登山这些年，我越来越体会到它的奥义也越来越认识到我自己是怎样的人。我常想，从我上一份工作开始，我就不自知地一直在接受所有地狱难度的挑战，我享受克服重重困难过后的成就感，登顶的绝美风光是不能说服自己克服艰险的人永远也无法看到的。
我选择登山运动，在与死神共舞。但是别人明白与否不重要，我自己活得明白就够了。登顶那一刻并不是真正的成功，因为对于一个攀登者来说，只有平安回到大本营，只有活着回到家才是真正的成功。对我而言，我攀登的已不仅仅是物理上的山峰，更是生命中的无限山峰。
登山永远是自己和自己较劲，人不可能战胜自然，只能在一次次挑战的过程中不断拓展自我边界和对世界的认知。在一个男性丛林拼杀的女性该是什么样子？一个数次与死亡擦肩而过但依然选择一次次重新出发的女性该是什么样子？
女性力量既可以包容万物，又可以气吞山河。很多人喜欢给我加上“登山家”的头衔，因为我是为数不多登顶过珠穆朗玛峰的中国女子登山运动员，但在我看来，所谓“职业运动员”应该可以凭借自己的项目带来不错的收入，过上更好的生活。
这个头衔看似很光鲜，但我完全不是，从选择登山以来，我没有品牌赞助，也没找过赞助商，我不想让自己在登山的时候总是想着杂事，背上除了背包之外的负担，所以我选择自己承担每一次登山的费用。
毫不夸张地说，登山是一项吃钱的项目，以珠峰为例，单次登珠峰的价格就要40万，这还不包括登山前的训练课程、全身心投入准备中所需要的时间成本，和其他更大的代价。
很多人觉得，我从原本的人生轨道走上了一条名利双收的道路，但事实上，选择登山之后，我的收入大幅减少，常常让自己处在吃老本的处境。
我身边的人会说，如果我还在做原本的工作，还在当那个干练精致的女白领，我的人生会更“容易”一些，因为从前的我几乎就是电视剧里精英女性的形象，我供职于一家世界500强企业，白天奔忙在各个经销商那里，闲暇时间出入高档购物中心，我每天都要穿戴得体背名牌包，一丝不苟的做发型和妆容。
那时，我拼命努力的工作，除了金钱上的收获，慢慢也在圈内积累了一些名气。但同时，我也开始做休闲式的徒步和登山，不知道各位在看的朋友是否有相同的感受，现代人的生活压力，很容易在山水间释放，当我的脚步踏在并不平坦的山路上时，工作上的琐事已经很难再扰乱我，我面前只有一条路，无法后退只能前进。
这种忘掉生活烦恼，专注眼前当下的感觉实在太令人着迷了，我一次一次在工作的间隙寻找释放的机会。直到比我小十岁的登山运动员，我已故的丈夫走进了我的生活，与他同行攀登的机会摆在我面前，我第一次走到了那个人生的十字路口。
于是，我的人生中有了两个截然不同的选择：继续做我的销售经理；或者辞掉工作去完成我的攀登梦想。要说完全没有纠结是不可能的，我的职场焦虑已经很难纾解，每天醒来我都觉得有些绝望，理想很丰满，但职场上的难题已经到了我用努力无法完成的地步了。
我开始劝自己：既然无论如何都完不成，何不干脆给自己放个长一点的假期，等“玩”够了我再考虑要不要重新回到这片战场。当时我的想法很简单，我仍旧无法完全放下的我的那些职场经验、人脉和资源，我只想有个假期能从攀登山峰回来再有重新选择的机会。但没想到，与先生第一次的攀登之旅完全改变了我的人生轨迹。
我很明白，我绝不想再背负职场的压力去过我的余生，我爱登山我爱探险，我就是要遵从自己的内心，去过我想要的生活。
登山这件事，有成功就会有失败，有站在山巅的人，就会有死在半路的人。我见过太多死在半路的人，虽然不像《珠峰清道夫》所拍摄的那么惨烈，但这个项目和行业就是会有死亡的风险。
很多人喜欢问我，为什么痴迷于登山。我的答案是：我喜欢我的生活在别处。当你在山脚下的大本营与不同国家的爱好者畅谈时，当你的足迹遍布这个世界上人迹罕至的地域时，当你在完全陌生的地方重新“活”一次的时候，那种快乐很难描述，它不完全是登山给予我的，而是从准备到完成的一整个过程。
但我必须说明，这个过程的不美好程度也一度令我难以承受，那就是死亡。每次攀登走进大本营，出行前我脑海中有无数的幻想，我幻想着站在世界之巅的成就感，幻想着环顾四周时辽阔世界带给我的冲击。
我的队友也与我一同在大本营做准备，这段时间我们朝夕相处，早就成为了无话不谈的好友。登山时团队成员互相之间的信任很重要，你要把自己的生死交给队友，我称之为“过命的交情”。
我很感激我的妈妈，她是真正懂我的人，很少“要求”我的人生必须怎样过。所以后来我真正登上珠峰的那一刻，我举着我自己自制的一面小旗子拍了张照片，旗子上写着：妈妈你是我的骄傲。这张照片我从没给别人看过，这是专属我和我妈的一张照片。
坦白说，我热爱生命，我越探索这个世界，就越认识到它的美好，就越想继续探索，我不想在自己这么年轻的时候就告别这个世界。我还有未完成的梦想，还有许许多多想去的地方。
但是，登山这些年，我越来越体会到它的奥义也越来越认识到我自己是怎样的人。我常想，从我上一份工作开始，我就不自知地一直在接受所有地狱难度的挑战，我享受克服重重困难过后的成就感，登顶的绝美风光是不能说服自己克服艰险的人永远也无法看到的。
我选择登山运动，在与死神共舞。但是别人明白与否不重要，我自己活得明白就够了。登顶那一刻并不是真正的成功，因为对于一个攀登者来说，只有平安回到大本营，只有活着回到家才是真正的成功。对我而言，我攀登的已不仅仅是物理上的山峰，更是生命中的无限山峰。
10月15日，中国科学院分子细胞科学卓越创新中心（生物化学与细胞生物学研究所）周斌研究员在国际学术期刊Trends in Cell Biology发表了题为“Harnessing orthogonal recombinases to decipher cell fate with enhanced precision”的综述文章。该文章系统地回顾了正交双同源重组酶系统遗传学操作的发展历程，深入讨论了双同源重组酶系统在各个器官与系统中的应用如何弥补了单同源重组酶系统的局限进而厘清了各领域内的争议问题，并且展望了正交同源重组酶系统未来的发展方向和新的研究思路。
Cre-loxP同源重组系统是在多种模式生物，尤其是小鼠中，广泛应用的遗传学操作系统。Cre重组酶能够识别loxP DNA序列并进行DNA序列插入、删除和反转操作。Cre-loxP系统常用于基因的条件型敲除或者重组删除STOP cassette来启动转基因，例如报告基因的表达。尽管其已经发展成为组织特异性与可诱导型的系统，Cre-loxP系统依然存在一些局限性并且导致了一些研究中实验结果的误读。与此同时，多种特异位点重组酶系统，例如Flp-frt、Dre-rox等在噬菌体等生物中被发现。在神经生物学领域中，Susan Dymecki等最早联用Cre和Flp两种特异位点重组酶来精确示踪，发现了中央神经系统中脉络丛和顶板结构的发育来源。由此开始，双同源重组系统被逐步应用到多个研究领域中。该综述以c-Kit+心肌干细胞的为例，聚焦于单重组酶系统依赖于单个基因调控元件的低特异性问题。c-Kit阳性的干细胞曾经被报道为内源性成体心脏干细胞，能够分化为包括心肌细胞在内的多种细胞，为心血管疾病的治疗带来了希望。然而，三个研究组分别使用基于c-Kit的谱系示踪工具并没能发现成年小鼠中c-Kit细胞的成心肌能力。为了厘清这一问题，周斌研究课题组利用Cre和Dre两种重组酶激活的双同源重组系统（DeaLT）来排除传统谱系示踪技术示踪c-Kit成体干细胞时对于心肌细胞的异位标记，实现了心肌细胞和cKit+非心肌细胞同时不可逆标记，从而精确地得出c-Kit阳性成体哺乳动物非心肌细胞在生理或病理情况下均不能发生向心肌细胞转变的结论。DeaLT后续同样被用于探寻所有非心肌细胞向心肌细胞的转变，成体肝细胞和胆管上皮细胞转化的可塑性，新生beta细胞的来源等各种需要同时精准示踪多种细胞类型的问题。
随着单细胞转录组学等技术发展，同一细胞类型内的异质性被越来越清晰地认知。双同源重组系统的选择性标记能力也使得研究者能够使用两个标记基因以不同的遗传学构造靶向它们的交集、补集或同时实现多个亚群的标记。通过构造新的基于Cre和Dre双同源重组酶的遗传学策略，周斌研究课题组实现了对于Sca1+细胞中的Sca1与PDGFRa或PDGFRb两群双阳性细胞的谱系示踪，确认了Sca1+ 细胞在动脉平滑肌修复中的作用，并且揭示了Sca1+细胞亚群中各异的平滑肌修复能力。类似方法也被用于脂肪细胞前体细胞和气管肺泡干细胞等细胞群的命运分析，以及神经系统中神经异质性和神经环路的标记。PDGFRa与PDGFRb双阳性与单阳性亚群只有使用双同源重组系统才能够进行同时地标记并平行分析，从而直接就三种细胞亚群对于新生脂肪细胞的贡献进行比较。传统方法也无法特异标记同时表达Club和AT2细胞标记基因CC10和SPC的气管-肺泡干细胞（BASCs），而研究人员通过双同源重组系统和Split-Cre系统分别独立对BASCs进行谱系示踪并就其对于肺损伤的修复贡献进行了探究。Josh Huang等则通过联用脑区域病毒注射、Cre与Flp双同源重组系统和Tet-On系统等，实现了通过神经连接、脑区位置、基因表达谱、发育时期和来源等多种维度的亚群标记GABA能神经元，对于揭示其各异的功能具有重大意义。
为了更好地研究目标细胞的生理功能与机制，特定细胞亚群的基因敲除或者细胞清除也可以通过双同源重组系统实现，弥补了广泛基因敲除或细胞清除不特异在研究细胞亚群功能中的缺陷。周斌研究课题组通过Plin1-dCreER策略实现了靶向无特异标记基因的白色脂肪细胞亚群（WAT）的Cre活性，从而实现在WAT中转录因子PPARγ的编码基因的敲除。此外，Wt1-CrexER通过Dre重组膜定位雌激素受体（ER）序列而将诱导型CreER转化为持续性的Cre，从而在心脏中特异性敲除内皮细胞中的VEGFR2，造成了心脏血管生成障碍。而另一研究通过Flp激活的Cre进行Rbpj敲除也抑制了动脉的分化，细致地探究了血管生成和分化过程中的分子调控机制。以上系统最终的效应重组酶都是Cre，因此可以兼容以往为Cre设计的多种细胞探针或者报告基因。在细胞层面上，双同源重组系统在脊髓背侧兴奋性或抑制性神经元中启动白喉毒素受体（DTR）表达来介导特定神经元的清除，直观地展示了这两种神经元在痛觉感受神经回路中的不同作用，完善了对于痛觉感受通路的了解。胰岛beta细胞特异的DTR表达和细胞清除也使得少数非beta细胞群分泌多种激素的可塑性得到揭示。
除了利用双同源重组系统高效而精准地实现细胞亚群中的基因敲除与细胞清除，多种双同源重组系统构造策略也已经实现对于短暂性细胞状态的无缝隙捕捉。Lgals-rox-STOP-rox-Cre的STOP在平滑肌细胞中被Dre重组，从而在Lgals3表达时启动Cre。即使这一基因在细胞转移完成后不再表达，也能实现所有Lgals3+平滑肌细胞的标记。揭示了平滑肌细胞在动脉粥样硬化损伤修复中短暂表达Lgals3并首先移动到损伤处的过程。类似地，Kit-CreER通过切割Vimentin-LSL-Dre和N-Cadherin-LSL-Dre的STOP cassette，使得Dre可以在luminal细胞发生EMT时表达，帮助揭示这些基因在乳腺癌细胞发生上皮-间质细胞转移时的作用和分子机制。研究生理环境下的短暂的细胞状态差异例如细胞周期的改变同样是非常重要的，而在肝细胞、心肌细胞或神经元中细胞周期活动都比较稀少和复杂。用传统的核酸类似物掺入或者免疫荧光染色检测这些细胞的增殖都会有信噪比低、可追踪时间不长等问题，并会受到增殖更旺盛的巨噬或内皮等细胞的干扰。而基于单分子的长期谱系示踪则局限于某些细胞亚群，不同的研究人员曾经提出Axin2+中央静脉周围肝细胞、Sox9+门静脉周围肝细胞理论或分散的Terthigh肝细胞具有增殖优势。但是，利用Ki67-CrexER，周斌研究课题组实现了所有细胞类型或者肝细胞特异的增殖信息长时程、不间断的记录。而基于Ki67-CrexER的ProTracer可以看到Zone 2的肝细胞荧光标记数量尤其高，指征这一区域的增殖优势。
该综述总结了多种类型的位点特异性重组酶及其遗传学操作特点，还总结了各种正交同源重组系统的设计思路。尽管双同源重组系统拥有揭示丰富的细胞和分子层面信息的能力，但其转基因小鼠构造复杂程度较高，并且受到位点特异型重组酶本身特性的掣肘，在实际应用中依然存在一些问题。该综述总结了重组酶非特异活性及双同源重组系统转基因小鼠构造繁琐等缺点，并提示了未来突破以上问题和提高正交同源重组酶在各种细胞类型或状态的准确标记和遗传学操作能力的研究方向。此外，本文也展望了未来正交同源重组系统用于细胞间接触或是各种细胞程序性死亡后标记的研究方向。
文章链接：https://t.cn/A6xowbWp
Cre-loxP同源重组系统是在多种模式生物，尤其是小鼠中，广泛应用的遗传学操作系统。Cre重组酶能够识别loxP DNA序列并进行DNA序列插入、删除和反转操作。Cre-loxP系统常用于基因的条件型敲除或者重组删除STOP cassette来启动转基因，例如报告基因的表达。尽管其已经发展成为组织特异性与可诱导型的系统，Cre-loxP系统依然存在一些局限性并且导致了一些研究中实验结果的误读。与此同时，多种特异位点重组酶系统，例如Flp-frt、Dre-rox等在噬菌体等生物中被发现。在神经生物学领域中，Susan Dymecki等最早联用Cre和Flp两种特异位点重组酶来精确示踪，发现了中央神经系统中脉络丛和顶板结构的发育来源。由此开始，双同源重组系统被逐步应用到多个研究领域中。该综述以c-Kit+心肌干细胞的为例，聚焦于单重组酶系统依赖于单个基因调控元件的低特异性问题。c-Kit阳性的干细胞曾经被报道为内源性成体心脏干细胞，能够分化为包括心肌细胞在内的多种细胞，为心血管疾病的治疗带来了希望。然而，三个研究组分别使用基于c-Kit的谱系示踪工具并没能发现成年小鼠中c-Kit细胞的成心肌能力。为了厘清这一问题，周斌研究课题组利用Cre和Dre两种重组酶激活的双同源重组系统（DeaLT）来排除传统谱系示踪技术示踪c-Kit成体干细胞时对于心肌细胞的异位标记，实现了心肌细胞和cKit+非心肌细胞同时不可逆标记，从而精确地得出c-Kit阳性成体哺乳动物非心肌细胞在生理或病理情况下均不能发生向心肌细胞转变的结论。DeaLT后续同样被用于探寻所有非心肌细胞向心肌细胞的转变，成体肝细胞和胆管上皮细胞转化的可塑性，新生beta细胞的来源等各种需要同时精准示踪多种细胞类型的问题。
随着单细胞转录组学等技术发展，同一细胞类型内的异质性被越来越清晰地认知。双同源重组系统的选择性标记能力也使得研究者能够使用两个标记基因以不同的遗传学构造靶向它们的交集、补集或同时实现多个亚群的标记。通过构造新的基于Cre和Dre双同源重组酶的遗传学策略，周斌研究课题组实现了对于Sca1+细胞中的Sca1与PDGFRa或PDGFRb两群双阳性细胞的谱系示踪，确认了Sca1+ 细胞在动脉平滑肌修复中的作用，并且揭示了Sca1+细胞亚群中各异的平滑肌修复能力。类似方法也被用于脂肪细胞前体细胞和气管肺泡干细胞等细胞群的命运分析，以及神经系统中神经异质性和神经环路的标记。PDGFRa与PDGFRb双阳性与单阳性亚群只有使用双同源重组系统才能够进行同时地标记并平行分析，从而直接就三种细胞亚群对于新生脂肪细胞的贡献进行比较。传统方法也无法特异标记同时表达Club和AT2细胞标记基因CC10和SPC的气管-肺泡干细胞（BASCs），而研究人员通过双同源重组系统和Split-Cre系统分别独立对BASCs进行谱系示踪并就其对于肺损伤的修复贡献进行了探究。Josh Huang等则通过联用脑区域病毒注射、Cre与Flp双同源重组系统和Tet-On系统等，实现了通过神经连接、脑区位置、基因表达谱、发育时期和来源等多种维度的亚群标记GABA能神经元，对于揭示其各异的功能具有重大意义。
为了更好地研究目标细胞的生理功能与机制，特定细胞亚群的基因敲除或者细胞清除也可以通过双同源重组系统实现，弥补了广泛基因敲除或细胞清除不特异在研究细胞亚群功能中的缺陷。周斌研究课题组通过Plin1-dCreER策略实现了靶向无特异标记基因的白色脂肪细胞亚群（WAT）的Cre活性，从而实现在WAT中转录因子PPARγ的编码基因的敲除。此外，Wt1-CrexER通过Dre重组膜定位雌激素受体（ER）序列而将诱导型CreER转化为持续性的Cre，从而在心脏中特异性敲除内皮细胞中的VEGFR2，造成了心脏血管生成障碍。而另一研究通过Flp激活的Cre进行Rbpj敲除也抑制了动脉的分化，细致地探究了血管生成和分化过程中的分子调控机制。以上系统最终的效应重组酶都是Cre，因此可以兼容以往为Cre设计的多种细胞探针或者报告基因。在细胞层面上，双同源重组系统在脊髓背侧兴奋性或抑制性神经元中启动白喉毒素受体（DTR）表达来介导特定神经元的清除，直观地展示了这两种神经元在痛觉感受神经回路中的不同作用，完善了对于痛觉感受通路的了解。胰岛beta细胞特异的DTR表达和细胞清除也使得少数非beta细胞群分泌多种激素的可塑性得到揭示。
除了利用双同源重组系统高效而精准地实现细胞亚群中的基因敲除与细胞清除，多种双同源重组系统构造策略也已经实现对于短暂性细胞状态的无缝隙捕捉。Lgals-rox-STOP-rox-Cre的STOP在平滑肌细胞中被Dre重组，从而在Lgals3表达时启动Cre。即使这一基因在细胞转移完成后不再表达，也能实现所有Lgals3+平滑肌细胞的标记。揭示了平滑肌细胞在动脉粥样硬化损伤修复中短暂表达Lgals3并首先移动到损伤处的过程。类似地，Kit-CreER通过切割Vimentin-LSL-Dre和N-Cadherin-LSL-Dre的STOP cassette，使得Dre可以在luminal细胞发生EMT时表达，帮助揭示这些基因在乳腺癌细胞发生上皮-间质细胞转移时的作用和分子机制。研究生理环境下的短暂的细胞状态差异例如细胞周期的改变同样是非常重要的，而在肝细胞、心肌细胞或神经元中细胞周期活动都比较稀少和复杂。用传统的核酸类似物掺入或者免疫荧光染色检测这些细胞的增殖都会有信噪比低、可追踪时间不长等问题，并会受到增殖更旺盛的巨噬或内皮等细胞的干扰。而基于单分子的长期谱系示踪则局限于某些细胞亚群，不同的研究人员曾经提出Axin2+中央静脉周围肝细胞、Sox9+门静脉周围肝细胞理论或分散的Terthigh肝细胞具有增殖优势。但是，利用Ki67-CrexER，周斌研究课题组实现了所有细胞类型或者肝细胞特异的增殖信息长时程、不间断的记录。而基于Ki67-CrexER的ProTracer可以看到Zone 2的肝细胞荧光标记数量尤其高，指征这一区域的增殖优势。
该综述总结了多种类型的位点特异性重组酶及其遗传学操作特点，还总结了各种正交同源重组系统的设计思路。尽管双同源重组系统拥有揭示丰富的细胞和分子层面信息的能力，但其转基因小鼠构造复杂程度较高，并且受到位点特异型重组酶本身特性的掣肘，在实际应用中依然存在一些问题。该综述总结了重组酶非特异活性及双同源重组系统转基因小鼠构造繁琐等缺点，并提示了未来突破以上问题和提高正交同源重组酶在各种细胞类型或状态的准确标记和遗传学操作能力的研究方向。此外，本文也展望了未来正交同源重组系统用于细胞间接触或是各种细胞程序性死亡后标记的研究方向。
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#2021中国网络媒体论坛#【努力讲好中国故事 让大流量澎湃正能量——写在2021中国网络媒体论坛系列活动结束之际】
由中央网信办、中央广播电视总台、广东省委网信委联合主办，以“发展与秩序·让大流量澎湃正能量”为主题的2021中国网络媒体论于11月24日至25日在广东省广州市举行。11月28日，伴随着“同心粤港澳 携手大湾区”网络主题活动的结束，整个2021中国网络媒体论坛以“1+5+1+1”形式开展的系列活动全部圆满落幕。
回顾整个论坛以及相关活动，精彩纷呈。首次举办中国网络媒体领域新技术、新应用、新业态展示会，首次以网络传播为主题举行大型线下展会；论坛首次在花城广州举办；发布《网络媒体社会责任倡议》，成立内容科技联盟……
11月26日-28日举行“同心粤港澳 携手大湾区”网络主题活动，是本次论坛的又一亮点。50余家来自中央及省级和地方重点媒体组成的记者团访广州、探深圳、赴珠海，深入改革腹地，重走开放前沿，用镜头和文字记录下粤港澳大湾区的发展变化，共同讲述湾区故事，探寻大湾区发展的神秘密码。
坐上这辆论坛主题列车，准备好向正能量出发
论坛召开前夕，广州地铁8号线推出了本次论坛的主题列车，11月22日，主题列车正式运行。
该主题列车以红色为内饰主基调，将本届论坛5个平行论坛的主题融入车厢设计，论坛主题语搭配广州地标建筑（五羊雕塑、广州塔“小蛮腰”、猎德大桥等）的线条绘图的设计作为车体内饰粘贴在车内，在“2021”的字样中，数字“0”也被改写成为符号“@”，突出网络这一元素。
2021中国网络媒体论坛虽然结束了，但这趟列车的步伐还没有结束。主题列车将会持续运营一个月的时间，继续将论坛主题和正能量传播到更远的地方。
技术革新为网络媒体赋能 更好传播红色文化
裸眼3D新闻、会摄影的机器狗，虚拟直播等纷纷亮相。24日上午，作为此次论坛“1+5+1+1”重要组成部分的首届网络传播领域新技术、新应用、新成果展示会揭开神秘面纱。展示会荟萃了中央新闻单位、地方新闻单位、知名互联网企业、县级融媒体中心及大湾区内的新媒体、互联网企业等43家单位参展，集中展现了我国网络媒体领域的新技术、新应用、新业态，是迄今为止国内规模最大、设计最新、覆盖最广、互动性最强的新媒体展示会。
裸眼3D新闻，不借助辅助设备，将报道主题和传播主要内容通过3D的形式展现出来，是新闻报道展现形式技术上的突破；会摄影的机器狗，相较于人力的拍摄过程，对复杂地形、危险环境、狭小空间等拍摄条件具有更好的适应性和安全性；专门为残障人士设计的无障碍直播技术，具备直播过程中音频时时转换文字出现在直播屏幕上并搭配手语的功能，实现残障人士实现收看直播的愿望。
本次展示会通过对先进的传播技术进行集中展示，彰显了先进科技为网络媒体赋能，多角度多维度的呈现了媒介融合下的新成果，分享了发展理念，借助数字科技和新技术更好地进行正能量传播。
湾区思辨：责任、技术、内容、技术，网媒发展一个不能少
11月25日上午举行开幕式暨主论坛，11月24日全天和25日下午分别举行5场平行论坛，围绕“传播：塑造价值”“创新：技术赋能”“发展：行稳致远”“责任：共治共享”“大湾区：一网相联”主题展开讨论。六场盛会汇聚了来自政府、学界、业界的多位领导及行业领军人物，齐聚广州，进行头脑风暴，探讨网络媒体发展，展示前沿科研技术，共同谱写网络媒体弘扬传播正能量的篇章。
11月25日，主论坛上，钟南山院士在发表主题演讲时介绍了我国新冠疫情防控工作的进展，阐释了网络媒体在疫情防控工作中的作用等。他表示，国家制定了从中央到地方的疫情防控常态化的措施，在多地的实践中都被证实是真实有效的。在正确的政策指导下，局地看似“凶猛的疫情”，“差不多在到三周就能得到控制”。他认为，网络媒体需要有责任和担当，要注意避免传达错误的信息和片面的消息，不应该为了博取眼球，对一些言论断章取义，掐头去尾，扩大不良的信息，“这是我们的良心”。
——责任：各界携手 共治共享
责任论坛上，国家高端智库中山大学粤港澳发展研究院副院长张志安在发表主题演讲时称，近期中国互联网平台治理具有监管力度强、监管领域聚焦等特点，未来平台的生态将呈现更加良性的状态。广东省网络空间安全协会副秘书长黄汝锡表示，网络媒体在网络安全中发挥着重要的作用，共建网络文明，需要多方的共同努力，共同打造可持续绿色的网络生态环境。
奥运击剑冠军孙一文，青年歌手、演员张艺兴作为文体届代表也出席了本场论坛活动，张艺兴在发言时说：“作为新时代的新青年，以作品和口碑说话，坚持作为时代责任人的态度，携手共建天朗气清的网络环境。”
——创新：技术赋能 点亮未来
在2021中国网络媒体论坛的技术论坛上，来自政府部门、主流媒体、科研机构、互联网企业的嘉宾代表围绕“创新：技术赋能”主题进行交流探讨，展示网络媒体领域最新发展成果。
在发布的成果中，“白泽搜索引擎系统”是其中一个亮点。人民网党委书记、董事长、总裁叶蓁蓁在进行成果分享时介绍，“白泽搜索引擎系统”主要特征就是跨平台，同时用一个搜索引擎就能够进行跨平台搜索、跨模态搜索，能够实现在视频搜索、溯源、辟谣、版权监测、视频生产等多个应用场景下的多种功能，成为媒体“内容风控”的“大脑”。
——传播：弘扬精神 塑造价值
“中国正在迅速走向世界政治、经济、技术舞台的中央，互联网应用的范围、广度、深度都走在世界最前列。”在以“传播：塑造价值”为主题内容论坛上，多位领导与嘉宾共同把握网络传播大势、谋划全媒体传播的未来。复旦大学中国研究院院长张维为就内容论坛主题发表主旨演讲时表达了以上观点。
张维为称：“所有从事互联网传播的人，都应具备世界眼光。要打学术话语、大众话语、国际话语的组合拳，有效应对西方话语的挑战，该亮剑就亮剑，该对话就对话。我们今天做的事，正在开创互联网的未来，正在为人类探索文明新形态作出中国贡献。”
——发展：守正创新 行稳致远
在产业论坛上，嘉宾围绕数字经济、科技创新、新媒体产业革新等话题相互交流探讨，分享经验，并开展了主题为“守正创新 有序发展”的圆桌对话。
薛晓峰表示，新一轮科技革命和产业革命正在重构全球创新的版图，也在重塑互联网行业生态和媒体发展的格局，面对当前形式与挑战，网络媒体应坚持正确导向、技术赋能、创新发展，担负起新时代赋予的职责和使命。
5G时代的到来，也为数字媒体产业和相关技术带来了新的发展机遇，在发展中创新与融合，推动媒体行业往高质量的方向发展。
——大湾区：跨区联合 一网相联
11月25日下午，以“大湾区·一网相连”为主题的中国网络媒体论坛大湾区论坛主题演讲结束后，一场跨界的圆桌对话在这里开展。
凤凰网COO刘爽强调，媒体在价值坚守、道德模范和意见领袖方面需要发挥关键的作用。澳门大学校长宋永华认为，实现大湾区“一网相联”应该让三地青年通过网络互相了解、相互理解、互相支持、互相合作。澎湃新闻网总裁、总编辑刘永钢号召，网络媒体要讲好中国故事，说好大湾区的故事，发出时代最强音。电商主播薇娅则表示，大湾区的发展也离不开互联网技术，大湾区集包容与创新于一体，能够带给年轻人很多机遇与挑战，“这个时候不来，什么时候来？快点来！”她说。
同心粤港澳 携手大湾区
——特色产业助力发展，广州为湾区注入澎湃动力
广州是“同心粤港澳 携手大湾区”网络主题活动的首站。作为国家中心城市和省会城市，广州既是大湾区四大中心城市之一，也是区域发展核心引擎中重要的组成部分，其充分发挥辐射效应，带动周边城市发展，实现与大湾区协同发展。
11月26日，50余家来自中央及省级和地方重点媒体组成的记者团走进琶洲人工智能与数字经济试验区，打卡乘坐无人驾驶车辆，了解南沙的发展规划，体验创新创业“一条龙”服务，探访广州港南沙港区，感受“广州速度”，亲身体会羊城特色产业的迷人魅力。
在与时间赛跑、不断追求卓越的过程中，广州的速度奇迹还在这里一幕幕上演着，并在不断创新和超越中刷新记录。共建共享、一网融通，未来的大湾区经济必然会绽放出更加灿烂多彩、百花齐放的科技魅力。
——年轻与古老并存，深圳让湾区舞出活力步伐
提到深圳，最先想到的是什么？是高楼林立、光怪陆离的摩天都市？是科技创新、新兴产业的集聚地？是“中国硅谷”、“深圳速度”？
“同心粤港澳 携手大湾区”网络主题活动走进深圳，在前海国际会议中心了解深圳的发展和蜕变，在前海石公园参观“改革开放再出发”的重要地标——前海石，参观各行各业的优秀企业代表，感受他们在这片热土上挥洒奋斗的汗水。
在深圳前海深港现代服务业合作区，记者团与香港青年代表们展开了一场跨越区域的别样对话。“前海已经成为与香港关联度最高、合作最紧密区域之一，我们立足这里，共同助力大湾区发展”“我想把大湾区不同城市的地标轮廓线连接起来形成一道风景线，用特有的手法展示在衣服上”“来到这里发展，政策上支持是一个契机，飞速发展的互联网行业是另一个契机”。湾区青年各抒己见，都表达出了把握当下，携手共绘湾区同心圆的中心思想。
为网络媒体产业发展把脉论道，共谋建设尽显担当、澎湃正能量的清朗网络空间；聚焦湾区发展建设的产业动力、人才动力，讲述区域文化协同、一网共融的湾区故事。
2021中国网络媒体论坛系列活动虽已落幕，“观察中国网络媒体发展走向的重要窗口”仍将继续打开。陆续返回各自工作岗位的中国网络媒体人，会将新理念、新技术、新课题传播、创新、研究下去，努力通过科技赋能，创造出更有价值的内容，全力讲好大湾区故事、中国故事，让大流量澎湃正能量，谱写中华民族自信豪迈的盛世华章。（中工网记者 王天玥 王妍）https://t.cn/A6xoThmG
由中央网信办、中央广播电视总台、广东省委网信委联合主办，以“发展与秩序·让大流量澎湃正能量”为主题的2021中国网络媒体论于11月24日至25日在广东省广州市举行。11月28日，伴随着“同心粤港澳 携手大湾区”网络主题活动的结束，整个2021中国网络媒体论坛以“1+5+1+1”形式开展的系列活动全部圆满落幕。
回顾整个论坛以及相关活动，精彩纷呈。首次举办中国网络媒体领域新技术、新应用、新业态展示会，首次以网络传播为主题举行大型线下展会；论坛首次在花城广州举办；发布《网络媒体社会责任倡议》，成立内容科技联盟……
11月26日-28日举行“同心粤港澳 携手大湾区”网络主题活动，是本次论坛的又一亮点。50余家来自中央及省级和地方重点媒体组成的记者团访广州、探深圳、赴珠海，深入改革腹地，重走开放前沿，用镜头和文字记录下粤港澳大湾区的发展变化，共同讲述湾区故事，探寻大湾区发展的神秘密码。
坐上这辆论坛主题列车，准备好向正能量出发
论坛召开前夕，广州地铁8号线推出了本次论坛的主题列车，11月22日，主题列车正式运行。
该主题列车以红色为内饰主基调，将本届论坛5个平行论坛的主题融入车厢设计，论坛主题语搭配广州地标建筑（五羊雕塑、广州塔“小蛮腰”、猎德大桥等）的线条绘图的设计作为车体内饰粘贴在车内，在“2021”的字样中，数字“0”也被改写成为符号“@”，突出网络这一元素。
2021中国网络媒体论坛虽然结束了，但这趟列车的步伐还没有结束。主题列车将会持续运营一个月的时间，继续将论坛主题和正能量传播到更远的地方。
技术革新为网络媒体赋能 更好传播红色文化
裸眼3D新闻、会摄影的机器狗，虚拟直播等纷纷亮相。24日上午，作为此次论坛“1+5+1+1”重要组成部分的首届网络传播领域新技术、新应用、新成果展示会揭开神秘面纱。展示会荟萃了中央新闻单位、地方新闻单位、知名互联网企业、县级融媒体中心及大湾区内的新媒体、互联网企业等43家单位参展，集中展现了我国网络媒体领域的新技术、新应用、新业态，是迄今为止国内规模最大、设计最新、覆盖最广、互动性最强的新媒体展示会。
裸眼3D新闻，不借助辅助设备，将报道主题和传播主要内容通过3D的形式展现出来，是新闻报道展现形式技术上的突破；会摄影的机器狗，相较于人力的拍摄过程，对复杂地形、危险环境、狭小空间等拍摄条件具有更好的适应性和安全性；专门为残障人士设计的无障碍直播技术，具备直播过程中音频时时转换文字出现在直播屏幕上并搭配手语的功能，实现残障人士实现收看直播的愿望。
本次展示会通过对先进的传播技术进行集中展示，彰显了先进科技为网络媒体赋能，多角度多维度的呈现了媒介融合下的新成果，分享了发展理念，借助数字科技和新技术更好地进行正能量传播。
湾区思辨：责任、技术、内容、技术，网媒发展一个不能少
11月25日上午举行开幕式暨主论坛，11月24日全天和25日下午分别举行5场平行论坛，围绕“传播：塑造价值”“创新：技术赋能”“发展：行稳致远”“责任：共治共享”“大湾区：一网相联”主题展开讨论。六场盛会汇聚了来自政府、学界、业界的多位领导及行业领军人物，齐聚广州，进行头脑风暴，探讨网络媒体发展，展示前沿科研技术，共同谱写网络媒体弘扬传播正能量的篇章。
11月25日，主论坛上，钟南山院士在发表主题演讲时介绍了我国新冠疫情防控工作的进展，阐释了网络媒体在疫情防控工作中的作用等。他表示，国家制定了从中央到地方的疫情防控常态化的措施，在多地的实践中都被证实是真实有效的。在正确的政策指导下，局地看似“凶猛的疫情”，“差不多在到三周就能得到控制”。他认为，网络媒体需要有责任和担当，要注意避免传达错误的信息和片面的消息，不应该为了博取眼球，对一些言论断章取义，掐头去尾，扩大不良的信息，“这是我们的良心”。
——责任：各界携手 共治共享
责任论坛上，国家高端智库中山大学粤港澳发展研究院副院长张志安在发表主题演讲时称，近期中国互联网平台治理具有监管力度强、监管领域聚焦等特点，未来平台的生态将呈现更加良性的状态。广东省网络空间安全协会副秘书长黄汝锡表示，网络媒体在网络安全中发挥着重要的作用，共建网络文明，需要多方的共同努力，共同打造可持续绿色的网络生态环境。
奥运击剑冠军孙一文，青年歌手、演员张艺兴作为文体届代表也出席了本场论坛活动，张艺兴在发言时说：“作为新时代的新青年，以作品和口碑说话，坚持作为时代责任人的态度，携手共建天朗气清的网络环境。”
——创新：技术赋能 点亮未来
在2021中国网络媒体论坛的技术论坛上，来自政府部门、主流媒体、科研机构、互联网企业的嘉宾代表围绕“创新：技术赋能”主题进行交流探讨，展示网络媒体领域最新发展成果。
在发布的成果中，“白泽搜索引擎系统”是其中一个亮点。人民网党委书记、董事长、总裁叶蓁蓁在进行成果分享时介绍，“白泽搜索引擎系统”主要特征就是跨平台，同时用一个搜索引擎就能够进行跨平台搜索、跨模态搜索，能够实现在视频搜索、溯源、辟谣、版权监测、视频生产等多个应用场景下的多种功能，成为媒体“内容风控”的“大脑”。
——传播：弘扬精神 塑造价值
“中国正在迅速走向世界政治、经济、技术舞台的中央，互联网应用的范围、广度、深度都走在世界最前列。”在以“传播：塑造价值”为主题内容论坛上，多位领导与嘉宾共同把握网络传播大势、谋划全媒体传播的未来。复旦大学中国研究院院长张维为就内容论坛主题发表主旨演讲时表达了以上观点。
张维为称：“所有从事互联网传播的人，都应具备世界眼光。要打学术话语、大众话语、国际话语的组合拳，有效应对西方话语的挑战，该亮剑就亮剑，该对话就对话。我们今天做的事，正在开创互联网的未来，正在为人类探索文明新形态作出中国贡献。”
——发展：守正创新 行稳致远
在产业论坛上，嘉宾围绕数字经济、科技创新、新媒体产业革新等话题相互交流探讨，分享经验，并开展了主题为“守正创新 有序发展”的圆桌对话。
薛晓峰表示，新一轮科技革命和产业革命正在重构全球创新的版图，也在重塑互联网行业生态和媒体发展的格局，面对当前形式与挑战，网络媒体应坚持正确导向、技术赋能、创新发展，担负起新时代赋予的职责和使命。
5G时代的到来，也为数字媒体产业和相关技术带来了新的发展机遇，在发展中创新与融合，推动媒体行业往高质量的方向发展。
——大湾区：跨区联合 一网相联
11月25日下午，以“大湾区·一网相连”为主题的中国网络媒体论坛大湾区论坛主题演讲结束后，一场跨界的圆桌对话在这里开展。
凤凰网COO刘爽强调，媒体在价值坚守、道德模范和意见领袖方面需要发挥关键的作用。澳门大学校长宋永华认为，实现大湾区“一网相联”应该让三地青年通过网络互相了解、相互理解、互相支持、互相合作。澎湃新闻网总裁、总编辑刘永钢号召，网络媒体要讲好中国故事，说好大湾区的故事，发出时代最强音。电商主播薇娅则表示，大湾区的发展也离不开互联网技术，大湾区集包容与创新于一体，能够带给年轻人很多机遇与挑战，“这个时候不来，什么时候来？快点来！”她说。
同心粤港澳 携手大湾区
——特色产业助力发展，广州为湾区注入澎湃动力
广州是“同心粤港澳 携手大湾区”网络主题活动的首站。作为国家中心城市和省会城市，广州既是大湾区四大中心城市之一，也是区域发展核心引擎中重要的组成部分，其充分发挥辐射效应，带动周边城市发展，实现与大湾区协同发展。
11月26日，50余家来自中央及省级和地方重点媒体组成的记者团走进琶洲人工智能与数字经济试验区，打卡乘坐无人驾驶车辆，了解南沙的发展规划，体验创新创业“一条龙”服务，探访广州港南沙港区，感受“广州速度”，亲身体会羊城特色产业的迷人魅力。
在与时间赛跑、不断追求卓越的过程中，广州的速度奇迹还在这里一幕幕上演着，并在不断创新和超越中刷新记录。共建共享、一网融通，未来的大湾区经济必然会绽放出更加灿烂多彩、百花齐放的科技魅力。
——年轻与古老并存，深圳让湾区舞出活力步伐
提到深圳，最先想到的是什么？是高楼林立、光怪陆离的摩天都市？是科技创新、新兴产业的集聚地？是“中国硅谷”、“深圳速度”？
“同心粤港澳 携手大湾区”网络主题活动走进深圳，在前海国际会议中心了解深圳的发展和蜕变，在前海石公园参观“改革开放再出发”的重要地标——前海石，参观各行各业的优秀企业代表，感受他们在这片热土上挥洒奋斗的汗水。
在深圳前海深港现代服务业合作区，记者团与香港青年代表们展开了一场跨越区域的别样对话。“前海已经成为与香港关联度最高、合作最紧密区域之一，我们立足这里，共同助力大湾区发展”“我想把大湾区不同城市的地标轮廓线连接起来形成一道风景线，用特有的手法展示在衣服上”“来到这里发展，政策上支持是一个契机，飞速发展的互联网行业是另一个契机”。湾区青年各抒己见，都表达出了把握当下，携手共绘湾区同心圆的中心思想。
为网络媒体产业发展把脉论道，共谋建设尽显担当、澎湃正能量的清朗网络空间；聚焦湾区发展建设的产业动力、人才动力，讲述区域文化协同、一网共融的湾区故事。
2021中国网络媒体论坛系列活动虽已落幕，“观察中国网络媒体发展走向的重要窗口”仍将继续打开。陆续返回各自工作岗位的中国网络媒体人，会将新理念、新技术、新课题传播、创新、研究下去，努力通过科技赋能，创造出更有价值的内容，全力讲好大湾区故事、中国故事，让大流量澎湃正能量，谱写中华民族自信豪迈的盛世华章。（中工网记者 王天玥 王妍）https://t.cn/A6xoThmG
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